[发明专利]表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用有效
| 申请号： | 201510226869.2 | 申请日： | 2015-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN105002147B | 公开（公告）日： | 2018-06-15 |
| 发明（设计）人： | 聂金梅;李阳源;周银华;陈丽芝;刘金山;李天碧 | 申请（专利权）人： | 广东溢多利生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京法思腾知识产权代理有限公司 11318 | 代理人： | 高宇 |
| 地址： | 519060 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域，具体涉及表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus niger GIM 3.452(CICC 2377)的葡萄糖氧化酶(GOD)基因(Genebank:FJ979866.1)进行定点突变，使其氨基酸序列突变位点为Y76C和Q279K；将突变基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA，转化Pichia pastoris X33，筛选得到表达量提高的葡萄糖氧化酶毕赤酵母菌株P.pastoris X33‑pPICZαA‑GODmut；酶学性质测定表明，突变的葡萄糖氧化酶基因能在毕赤酵母中稳定、高效的表达及遗传，突变菌株所表达的葡萄糖氧化酶的酶活性以及稳定性显著高于出发菌株。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。 1 | ||
| 搜索关键词： | 葡萄糖氧化酶 表达量 突变 氨基酸序列 毕赤酵母 编码基因 葡萄糖氧化酶基因 毕赤酵母菌株 定点突变技术 基因工程领域 表达载体 出发菌株 定点突变 酶学性质 突变基因 突变菌株 突变位点 黑曲霉 酶活性 应用 克隆 遗传 筛选 基因 转化 | ||
【主权项】：
1.一种突变的葡萄糖氧化酶GOD，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种突变的葡萄糖氧化酶基因，其特征在于，所述基因编码权利要求1所述的突变的葡萄糖氧化酶GOD。3.根据权利要求2所述的突变的葡萄糖氧化酶基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.包含权利要求2所述的突变的葡萄糖氧化酶基因的重组表达载体。5.一种构建高表达葡萄糖氧化酶的基因工程菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）将权利要求2所述的突变的葡萄糖氧化酶基因连接到毕赤酵母表达载体，得到重组表达载体；
（2）将获得的重组表达载体转化Pichia pastoris X33得到基因工程菌。
6.一种高表达葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）发酵包含权利要求2所述的突变的葡萄糖氧化酶基因的基因工程菌株；
（2）诱导表达葡萄糖氧化酶；
（3）发酵结束后，回收并纯化所表达的葡萄糖氧化酶。
7.权利要求1所述的突变的葡萄糖氧化酶GOD在制备食品或饲料中的应用。
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