[发明专利]一种酶解蛋白质的方法

摘要

本发明公开了一种酶解蛋白质的方法，将蛋白质加水搅拌均匀，放入电泳槽，在80‑120V电压下电泳，电泳结束后收集蛋白质溶液，使用含有三氟乙醇的酶解缓冲溶液溶解蛋白质，之后对蛋白质进行还原和烷基化处理，将处理后的蛋白质溶液调节pH至7.5‑8.5，然后加入占整个溶液体积90％‑98％的胰蛋白酶，酶解，得到多肽产物；其中，电泳槽中的工作电极为氧化还原酶和锌铝层状双氢氧化物修饰的电极。本发明得到适合液相色谱‑串联质谱分析肽段所用的酶解方法，为蛋白质组学分析提供稳定可靠的样品制备技术。

主权项

一种酶解蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、制备工作电极，工作电极为氧化还原酶和锌铝层状双氢氧化物修饰的电极；步骤二、将蛋白质加水搅拌均匀，倒入电泳槽的阴极，在80‑120V电压下电泳，电泳结束后在电泳槽的阳极收集蛋白质溶液；步骤三、将步骤二中所得的蛋白质溶液加入到所述酶解缓冲溶液中，其中，蛋白质和酶解缓冲溶液的质量比为1:20‑30，所述酶解缓冲溶液由碳酸氢铵、三氟乙醇和乙腈按质量比为2:40‑60:8‑15组成，并用超声波处理3‑5分钟；步骤四、在步骤三中所得蛋白质溶液中加入6‑15mmol/L的二硫苏糖醇，在55‑65℃下静置30‑60分钟；步骤五、在步骤四中所得蛋白质溶液中加入15‑25mmol/L的碘乙酰胺，在室温下静置20‑40分钟；步骤六、在步骤五中所得蛋白质溶液中加入40mmol/L碳酸氢铵调节pH至8；步骤七、在步骤六中所得蛋白质溶液中加入占整个溶液体积90％‑98％胰蛋白酶，在50℃‑60℃下酶解3.5‑4.5h，即可获得酶解后的多肽产物。