[发明专利]一种抗链球菌溶血素“O”检测试剂盒及其制备

摘要

本发明提供一种抗链球菌溶血素“O”(ASO)检测试剂盒，所述试剂盒基于胶乳增强免疫比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1为反应剂，试剂R2为含有ASO胶乳颗粒的溶液，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺(EDC)与N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)使溶血素“O”与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成ASO胶乳试剂。本试剂灵敏度高，特异性强，试剂配制简单，值得进一步推广使用。

主权项

一种抗链球菌溶血素“O”检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒基于胶乳增强免疫比浊法，为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1为反应剂，试剂R2为含有抗链球菌溶血素“O”胶乳颗粒的溶液，试剂R1和试剂R2具体成分如下：试剂R1：乙二氨四乙酸二钠                    5.0mmol/L氯化钠                              100mmol/LTris缓冲液                          15mmol/L试剂R2：氯化钠                              100mmol/L抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂           400ml/L该抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂通过以下方法制备：（1）相关缓冲液的准备活化缓冲液：取800ml去离子水溶解9.76gN‑吗啉乙磺酸，0.1%NaOH调pH至6.1，用去离子水定容至1L，15psi湿热灭菌20min；标记缓冲液：取800ml去离子水溶解9.13g磷酸一氢钾和1.36g磷酸二氢钾，0.1%盐酸调pH至7.4，用去离子水定容至1L，15psi湿热灭菌20min；保存缓冲液：800ml去离子水溶解9.13g磷酸一氢钾，1.36g磷酸二氢钾，1.0g Tween 20，0.1%盐酸调pH至7.4，用去离子水定容至1L，15psi湿热灭菌20min；EDC活化缓冲液：取20mg EDC，溶于10ml活化缓冲液中，制成EDC活化缓冲液；NHS活化缓冲液：取40mg NHS，溶于10ml活化缓冲液中，制成NHS活化缓冲液；（2）抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂的配制 原料：羧化聚苯乙烯胶乳粒径为100‑150nm，浓度为10%，取1ml，溶于3‑7ml活化缓冲液中进行稀释，稀释好的微球溶液中加入1ml EDC活化缓冲液，1ml NHS活化缓冲液， 20‑25℃震荡10min，37℃恒温水浴20min，在2‑8℃下、12000rpm条件下离心30min，去除上清液，用标记缓冲液洗涤一次后，用标记缓冲液稀释至7ml，边搅拌边加入50mg抗链球菌溶血素“O”，用标记缓冲液补足至10ml， 20‑25℃震荡3小时，37℃恒温水浴3小时，在12000rpm下离心30min，去除上清液，并用标记缓冲液缓冲液洗涤两次，洗涤后用保存缓冲液配成1%重量体积比的悬液，以0.1%重量体积比叠氮钠溶液防腐，即为抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂。