[发明专利]一种抗肿瘤泛素化蛋白及其提取方法和应用

摘要

本发明公开了一种泛素化蛋白，其主要是由以下步骤提取所得：(1)肿瘤细胞的培养：复苏冻存的肿瘤细胞，按照常规培养方法培养；(2)肿瘤细胞的处理：(3)提取泛素化蛋白。发明还公开了所述泛素化蛋白的提取方法，以及所述泛素化蛋白在制备肿瘤治疗性疫苗中的应用。相对于现有技术，本发明蛋白能够大大提高交叉免疫反应的效果，大幅提高对不同种类肿瘤的抑制效果；此外，还克服了泛素化短寿蛋白降解快的问题，能够快速获取大量泛素化蛋白；最后，克服了短寿蛋白与长寿蛋白之间的不对称性，增加诱导特异性效应细胞的靶点，弥补以“长寿蛋白”为基础的肿瘤疫苗抗肿瘤效果不佳的缺陷。

主权项

一种抗肿瘤泛素化蛋白，其特征在于，其主要是由以下步骤提取所得：(1)肿瘤细胞的培养：复苏冻存的肿瘤细胞，按照常规培养方法培养；(2)肿瘤细胞的处理：按步骤(1)方法培养细胞待细胞生长至80％，加入雷帕霉素、万珂和氯化铵，加入量分别为(80‑120)nmol/L、(160‑240)nmol/L和(25‑35)mmol/L，干预肿瘤细胞14‑18小时，抑制泛素化蛋白的降解；(3)提取泛素化蛋白：将步骤(2)所得细胞经细胞裂解液处理后，离心得到沉淀，取上清液并同Vx3(A7)蛋白共孵育，经镍离子亲和层析可得到泛素化蛋白。