[发明专利]检测呼吸道感染相关病原微生物的系统及其专用LAMP引物

摘要

本发明公开了检测呼吸道感染相关病原微生物的系统及其专用LAMP引物。该系统化包括检测呼吸道感染相关病原微生物的环介导等温扩增的成套引物和/或环介导等温扩增所需的试剂和/或仪器和/或扩增产物数据处理器；所述扩增产物数据处理器用于区分检测呼吸道感染相关病原微生物的环介导等温扩增的成套引物对待测样本进行环介导等温扩增得到的待测样本扩增产物中是否含有特异性扩增产物。本发明提供的检测呼吸道感染相关病原微生物的系统操作简单、结果便于观察，对常见呼吸道感染相关病原菌可快速、准确的鉴定。

主权项

检测呼吸道感染相关病原微生物的环介导等温扩增的成套引物，为用于检测肺炎链球菌的引物组、用于检测金黄色葡萄球菌的引物组、用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的引物组、用于检测大肠埃希氏菌的引物组、用于检测肺炎克雷伯菌的引物组、用于检测铜绿假单胞菌的引物组、用于检测嗜麦芽窄食单胞菌的引物组、用于检测嗜肺军团菌的引物组、用于检测结核分枝杆菌复合群的引物组、用于检测肺炎支原体的引物组和用于检测肺炎衣原体的引物组；所述用于检测肺炎链球菌的引物组为肺炎链球菌正义6引物组或肺炎链球菌正义4引物组；所述肺炎链球菌正义6引物组由肺炎链球菌引物F3‑Z、肺炎链球菌引物B3‑Z、肺炎链球菌引物FIP‑Z、肺炎链球菌引物BIP‑Z、肺炎链球菌引物LF‑Z和肺炎链球菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述肺炎链球菌正义4引物组由所述肺炎链球菌引物F3‑Z、所述肺炎链球菌引物B3‑Z、所述肺炎链球菌引物FIP‑Z和所述肺炎链球菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述肺炎链球菌引物F3‑Z为SEQ ID No.1的第6‑25位核苷酸的单链DNA；所述肺炎链球菌引物B3‑Z为SEQ ID No.1的第213‑229位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎链球菌引物FIP‑Z为结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.1的第79‑100位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸序列为GTAG，所述B是SEQ ID No.1的第39‑55位核苷酸组成的单链DNA；所述肺炎链球菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.1的第101‑124位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸序列为AACAAC，所述B是SEQ ID No.1的第166‑185位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述肺炎链球菌引物LF‑Z为SEQ ID No.1的第56‑77位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎链球菌引物LB‑Z为SEQ ID No.1的第126‑146位核苷酸的单链DNA片段；所述用于检测金黄色葡萄球菌的引物组为金黄色葡萄球菌正义6引物组或金黄色葡萄球菌正义4引物组；所述金黄色葡萄球菌正义6引物组由金黄色葡萄球菌引物F3‑Z、金黄色葡萄球菌引物B3‑Z、金黄色葡萄球菌引物FIP‑Z、金黄色葡萄球菌引物BIP‑Z、金黄色葡萄球菌引物LF‑Z和金黄色葡萄球菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述金黄色葡萄球菌正义4引物组由所述金黄色葡萄球菌引物F3‑Z、所述金黄色葡萄球菌引物B3‑Z、所述金黄色葡萄球菌引物FIP‑Z和所述金黄色葡萄球菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述金黄色葡萄球菌引物F3‑Z为SEQ ID No.2的第11‑30位核苷酸的单链DNA；所述金黄色葡萄球菌引物B3‑Z为SEQ ID No.2的第222‑243位核苷酸的反向互补单链DNA；所述金黄色葡萄球菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.2的第72‑95位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0个核苷酸的单链DNA，所述B是SEQ ID No.2的第31‑50位核苷酸组成的单链DNA；所述金黄色葡萄球菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.2的第127‑149位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.2的第196‑212位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述金黄色葡萄球菌引物LF‑Z为SEQ ID No.2的第54‑71位核苷酸的反向互补单链DNA；所述金黄色葡萄球菌引物LB‑Z为SEQ ID No.2的第157‑178位核苷酸的单链DNA片段；所述用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的引物组为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌正义6引物组或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌正义4引物组；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌正义6引物组由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物F3‑Z、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物B3‑Z、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物FIP‑Z、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物BIP‑Z、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物LF‑Z和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌正义4引物组由所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物F3‑Z、所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物B3‑Z、所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物FIP‑Z和所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物F3‑Z为SEQ ID No.3的第12‑30位核苷酸的单链DNA；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物B3‑Z为SEQ ID No.3的第211‑234位核苷酸的反向互补单链DNA；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.3的第97‑121位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.3的第47‑71位核苷酸组成的单链DNA；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.3的第133‑156位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.3的第182‑206位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物LF‑Z为SEQ ID No.3的第72‑95位核苷酸的反向互补单链DNA片段，该单链DNA片段名称为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物LF‑Z1；所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引物LB‑Z为SEQ ID No.3的第157‑181位核苷酸的单链DNA；所述用于检测大肠埃希氏菌的引物组为大肠埃希氏菌正义6引物组或大肠埃希氏菌正义4引物组；所述大肠埃希氏菌正义6引物组由大肠埃希氏菌引物F3‑Z、大肠埃希氏菌引物B3‑Z、大肠埃希氏菌引物FIP‑Z、大肠埃希氏菌引物BIP‑Z、大肠埃希氏菌引物LF‑Z和大肠埃希氏菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述大肠埃希氏菌正义4引物组由所述大肠埃希氏菌引物F3‑Z、所述大肠埃希氏菌引物B3‑Z、所述大肠埃希氏菌引物FIP‑Z和所述大肠埃希氏菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述大肠埃希氏菌引物F3‑Z为SEQ ID No.4的第11‑30位核苷酸的单链DNA；所述大肠埃希氏菌引物B3‑Z为SEQ ID No.4的第200‑219位核苷酸的反向互补单链DNA；所述大肠埃希氏菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.4的第77‑96位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸序列为CT，所述B是SEQ ID No.4的第38‑55位核苷酸组成的单链DNA；所述大肠埃希氏菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.4的第101‑122位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸序列为TTT，所述B是SEQ ID No.4的第163‑183位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述大肠埃希氏菌引物LF‑Z为SEQ ID No.4的第56‑76位核苷酸的反向互补单链DNA片段；所述大肠埃希氏菌引物LB‑Z为SEQ ID No.4的第137‑154位核苷酸的单链DNA；所述用于检测肺炎克雷伯菌的引物组为肺炎克雷伯菌正义6引物组或肺炎克雷伯菌正义4引物组；所述肺炎克雷伯菌正义6引物组由肺炎克雷伯菌引物F3‑Z、肺炎克雷伯菌引物B3‑Z、肺炎克雷伯菌引物FIP‑Z、肺炎克雷伯菌引物BIP‑Z、肺炎克雷伯菌引物LF‑Z和肺炎克雷伯菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述肺炎克雷伯菌正义4引物组由所述肺炎克雷伯菌引物F3‑Z、所述肺炎克雷伯菌引物B3‑Z、所述肺炎克雷伯菌引物FIP‑Z和所述肺炎克雷伯菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述肺炎克雷伯菌引物F3‑Z为SEQ ID No.5的第14‑30位核苷酸的单链DNA；所述肺炎克雷伯菌引物B3‑Z为SEQ ID No.5的第186‑203位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎克雷伯菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.5的第90‑108位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.5的第38‑54位核苷酸组成的单链DNA；所述肺炎克雷伯菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.5的第118‑140位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸序列为TTTT，所述B是SEQ ID No.5的第168‑185位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述肺炎克雷伯菌引物LF‑Z为SEQ ID No.5的第68‑88位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎克雷伯菌引物LB‑Z为SEQ ID No.5的第151‑167位核苷酸的单链DNA；所述用于检测铜绿假单胞菌的引物组为铜绿假单胞菌正义6引物组和铜绿假单胞菌正义4引物组；所述铜绿假单胞菌正义6引物组由铜绿假单胞菌引物F3‑Z、铜绿假单胞菌引物B3‑Z、铜绿假单胞菌引物FIP‑Z、铜绿假单胞菌引物BIP‑Z、铜绿假单胞菌引物LF‑Z和铜绿假单胞菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述铜绿假单胞菌正义4引物组由所述铜绿假单胞菌引物F3‑Z、所述铜绿假单胞菌引物B3‑Z、所述铜绿假单胞菌引物FIP‑Z和所述铜绿假单胞菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述铜绿假单胞菌引物F3‑Z为SEQ ID No.6的第11‑30位核苷酸的单链DNA；所述铜绿假单胞菌引物B3‑Z为SEQ ID No.6的第218‑235位核苷酸的反向互补单链DNA；所述铜绿假单胞菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.6的第75‑93位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.6的第35‑53位核苷酸组成的单链DNA；所述铜绿假单胞菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.6的第126‑144位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.6的第188‑205位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述铜绿假单胞菌引物LF‑Z为SEQ ID No.6的第54‑73位核苷酸的反向互补单链DNA；所述铜绿假单胞菌引物LB‑Z为SEQ ID No.6的第153‑169位核苷酸的单链DNA；所述用于检测嗜麦芽窄食单胞菌的引物组为嗜麦芽窄食单胞菌正义6引物组或嗜麦芽窄食单胞菌正义4引物组；所述嗜麦芽窄食单胞菌正义6引物组由嗜麦芽窄食单胞菌引物F3‑Z、嗜麦芽窄食单胞菌引物B3‑Z、嗜麦芽窄食单胞菌引物FIP‑Z、嗜麦芽窄食单胞菌引物BIP‑Z、嗜麦芽窄食单胞菌引物LF‑Z和嗜麦芽窄食单胞菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述嗜麦芽窄食单胞菌正义4引物组由所述嗜麦芽窄食单胞菌引物F3‑Z、所述嗜麦芽窄食单胞菌引物B3‑Z、所述嗜麦芽窄食单胞菌引物FIP‑Z和所述嗜麦芽窄食单胞菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物F3‑Z为SEQ ID No.8的第11‑30位核苷酸的单链DNA；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物B3‑Z为SEQ ID No.8的第197‑213位核苷酸的反向互补单链DNA；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.8的第81‑100位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.8的第41‑57位核苷酸组成的单链DNA；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.8的第109‑132位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.8的第175‑193位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物LF‑Z为SEQ ID No.8的第58‑73位核苷酸的反向互补单链DNA；所述嗜麦芽窄食单胞菌引物LB‑Z为SEQ ID No.8的第136‑153位核苷酸的单链DNA；所述用于检测嗜肺军团菌的引物组为嗜肺军团菌正义6引物组或嗜肺军团菌正义4引物组；所述嗜肺军团菌正义6引物组由嗜肺军团菌引物F3‑Z、嗜肺军团菌引物B3‑Z、嗜肺军团菌引物FIP‑Z、嗜肺军团菌引物BIP‑Z、嗜肺军团菌引物LF‑Z和嗜肺军团菌引物LB‑Z这6条引物组成；所述嗜肺军团菌正义4引物组由所述嗜肺军团菌引物F3‑Z、所述嗜肺军团菌引物B3‑Z、所述嗜肺军团菌引物FIP‑Z和所述嗜肺军团菌引物BIP‑Z这4条引物组成；所述嗜肺军团菌引物F3‑Z为SEQ ID No.10的第10‑30位核苷酸的单链DNA；所述嗜肺军团菌引物B3‑Z为SEQ ID No.10的第197‑215位核苷酸的反向互补单链DNA；所述嗜肺军团菌引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.10的第77‑96位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.10的第35‑53位核苷酸组成的单链DNA；所述嗜肺军团菌引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.10的第126‑147位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.10的第179‑196位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述嗜肺军团菌引物LF‑Z为SEQ ID No.10的第55‑76位核苷酸的反向互补单链DNA；所述嗜肺军团菌引物LB‑Z为SEQ ID No.10的第154‑176位核苷酸的单链DNA；所述用于检测结核分枝杆菌复合群的引物组为结核分枝杆菌复合群正义6引物组或结核分枝杆菌复合群正义4引物组；所述结核分枝杆菌复合群正义6引物组由结核分枝杆菌复合群引物F3‑Z、结核分枝杆菌复合群引物B3‑Z、结核分枝杆菌复合群引物FIP‑Z、结核分枝杆菌复合群引物BIP‑Z、结核分枝杆菌复合群引物LF‑Z和结核分枝杆菌复合群引物LB‑Z这6条引物组成；所述结核分枝杆菌复合群正义4引物组由所述结核分枝杆菌复合群引物F3‑Z、所述结核分枝杆菌复合群引物B3‑Z、所述结核分枝杆菌复合群引物FIP‑Z和所述结核分枝杆菌复合群引物BIP‑Z这4条引物组成；所述结核分枝杆菌复合群引物F3‑Z为SEQ ID No.11的第14‑30位核苷酸的单链DNA；所述结核分枝杆菌复合群引物B3‑Z为SEQ ID No.11的第175‑190位核苷酸的反向互补单链DNA；所述结核分枝杆菌复合群引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.11的第68‑90位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.11的第32‑51位核苷酸组成的单链DNA；所述结核分枝杆菌复合群引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.11的第113‑130位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.11的第147‑167位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述结核分枝杆菌复合群引物LF‑Z为SEQ ID No.11的第52‑67位核苷酸的反向互补单链DNA；所述结核分枝杆菌复合群引物LB‑Z为SEQ ID No.11的第131‑144位核苷酸的单链DNA；所述用于检测肺炎支原体的引物组为肺炎支原体正义6引物组或肺炎支原体正义4引物组；所述肺炎支原体正义6引物组由肺炎支原体引物F3‑Z、肺炎支原体引物B3‑Z、肺炎支原体引物FIP‑Z、肺炎支原体引物BIP‑Z、肺炎支原体引物LF‑Z和肺炎支原体引物LB‑Z这6条引物组成；所述肺炎支原体正义4引物组由所述肺炎支原体引物F3‑Z、所述肺炎支原体引物B3‑Z、所述肺炎支原体引物FIP‑Z和所述肺炎支原体引物BIP‑Z这4条引物组成；所述肺炎支原体引物F3‑Z为SEQ ID No.12的第14‑30位核苷酸的单链DNA；所述肺炎支原体引物B3‑Z为SEQ ID No.12的第179‑195位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎支原体引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.12的第71‑89位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.12的第31‑51位核苷酸组成的单链DNA；所述肺炎支原体引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.12的第99‑117位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.12的第155‑171位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述肺炎支原体引物LF‑Z为SEQ ID No.12的第52‑67位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎支原体引物LB‑Z为SEQ ID No.12的第123‑138位核苷酸的单链DNA；所述用于检测肺炎衣原体的引物组为肺炎衣原体正义6引物组或肺炎衣原体正义4引物组；所述肺炎衣原体正义6引物组由肺炎衣原体引物F3‑Z、肺炎衣原体引物B3‑Z、肺炎衣原体引物FIP‑Z、肺炎衣原体引物BIP‑Z、肺炎衣原体引物LF‑Z和肺炎衣原体引物LB‑Z这6条引物组成；所述肺炎衣原体正义4引物组由所述肺炎衣原体引物F3‑Z、所述肺炎衣原体引物B3‑Z、所述肺炎衣原体引物FIP‑Z和所述肺炎衣原体引物BIP‑Z这4条引物组成；所述肺炎衣原体引物F3‑Z为SEQ ID No.13的第7‑30位核苷酸的单链DNA；所述肺炎衣原体引物B3‑Z为SEQ ID No.13的第203‑220位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎衣原体引物FIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.13的第76‑95位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述linker的核苷酸长度为0，所述B是SEQ ID No.13的第35‑54位核苷酸组成的单链DNA；所述肺炎衣原体引物BIP‑Z是结构为A‑linker‑B的单链DNA，所述A是SEQ ID No.13的第127‑152位核苷酸组成的单链DNA；所述linker的核苷酸序列为TT，所述B是SEQ ID No.13的第183‑202位核苷酸组成的单链DNA的反向互补单链DNA；所述肺炎衣原体引物LF‑Z为SEQ ID No.13的第55‑75位核苷酸的反向互补单链DNA；所述肺炎衣原体引物LB‑Z为SEQ ID No.13的第157‑179位核苷酸的单链DNA；所述呼吸道感染相关病原微生物为下述十一种病原微生物中的十一种、任十种、任九种、任八种、任七种、任六种、任五种、任四种、任三种、任两种或任一种：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、嗜肺军团菌、结核分枝杆菌复合群、肺炎支原体和肺炎衣原体。