[发明专利]藏药马尿泡快繁体系的建立方法

摘要

本发明公开了藏药马尿泡快繁体系的建立方法，首先获得马尿泡种子无菌苗的获得；对马尿泡种子无菌苗进行芽增殖；获得大量长势一致的丛生芽；对丛生芽生根培养；获得马尿泡快繁苗。本发明将野生种子保存和组织培养生物技术体系有效的结合，创建了藏药马尿泡组培苗及茎段快繁体系，克服了马尿泡种子在自然条件下难萌发、野生材料获得困难、传统组织培养取材受季节限制的难题。

主权项

藏药马尿泡快繁体系的建立方法，其特征在于按照以下步骤进行：第1步：马尿泡种子无菌苗的获得；将干燥的马尿泡种子放置于三角瓶中，用蒸馏水冲洗三次，每次遗弃漂浮的种子，将筛选好的种子用400ppm赤霉素浸泡24h，用蒸馏水冲洗三次，然后将处理好的种子放于超净工作台中，用乙醇水溶液消毒1min，无菌水冲洗3次，然后用NaClO水溶液消毒20min，无菌水冲洗6次，将经过消毒的马尿泡种子播种在装有30mlMS培养基的三角瓶中，在恒温培养箱中22℃暗培养，待种子发芽后转入光照培养箱培养，培养条件为光照条件：培养温度20℃‑24℃，光照强度为3000lx，12h.d^‑1光照条件下培养，黑暗条件：培养温度20℃‑24℃。在光照培养箱生长25‑30d获得长势一致的马尿泡种子无菌苗；第2步：芽增殖；在超净工作台，将马尿泡种子无菌苗取出，切取带有腋芽的茎段，接种在MS+6‑BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L固体培养基中，每瓶接种5个，培养条件：培养温度23℃‑27℃，光照强度为3000lx，12h.d^‑1光照条件下培养，获得大量长势一致的丛生芽；第3步：丛生芽生根培养；在超净工作台上，将丛生芽取出，将丛生芽分割成带有1‑2个芽体的外植体，然后将分离的芽体接种在MS+0.5mg/L NAA的培养基上，培养条件：培养温度23℃‑27℃，光照强度为3000lx，12h.d^‑1光照条件下培养，获得马尿泡快繁苗。