[发明专利]一种质粒大规模制备工艺在审
| 申请号： | 201510236995.6 | 申请日： | 2015-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN104830746A | 公开（公告）日： | 2015-08-12 |
| 发明（设计）人： | 郭广君;吕素芳;沈志强;吴信明;付强;王艳 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京国智京通知识产权代理有限公司 11501 | 代理人： | 郭智 |
| 地址： | 山东省滨*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种质粒大规模制备工艺，包括生产种子发制备；高密度发酵；菌体收获；去除RNA；提取质粒和质粒纯化。本发明的质粒大规模制备工艺，方法简单，操作方便，能够大量生产质粒，降低生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 质粒 大规模 制备 工艺 | ||
【主权项】：
一种质粒大规模制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：生产种子制备；高密度发酵；菌体收获；去除RNA；提取质粒；质粒纯化；所述生产种子制备步骤包括：取典型菌落划线LB琼脂平板，37℃培养过夜，用0.01mol/L，pH7.2的PBS溶液洗下至LB液体培养基，分装于灭菌瓶，加10％甘油混匀，作为一级种子，‑70℃保存，接种一级种子至含30μg/mL卡那霉素的LB培养基，趋饱和期的细菌提取质粒，PCR产物测序鉴定，无突变及其它非目的性重组产生即为合格的一级种子；将所述合格的一级种子接种于50ml揺瓶培养基中，置摇床37℃，200r/min培养12h，作为二级种子。
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