[发明专利]五月瓜藤种苗的培养方法

摘要

本发明属于植物细胞工程技术领域，五月瓜藤种苗的培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导、丛生芽诱导增殖、生根培养及移栽；采用本发明生产五月瓜藤种苗的技术方案，其产生的有益效果是（1）增殖率高，生物产量大，培养周期短；（2）组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高；本发明利用通过预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导、丛生芽诱导增殖和生根培养及移栽的方法对五月瓜藤种苗进行培育相对于其它培养方式具有扩繁效率高、培养时间短、转接方便；种苗健壮、栽培成活率高及成本低，适合五月瓜藤种苗规模化培育生产。

主权项

一种五月瓜藤种苗的培养方法，培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽诱导增殖、生根培养及移栽；其特征在于，具体包括以下步骤：（1）预处理：不同的外植体的类型采用不同的浸泡预处理及冷藏预处理；（2）无菌外植体获得：对外植体进行消毒灭菌处理获得无菌外植体用于下一步培养；（3）愈伤组织诱导培养：将步骤（2）中获得的无菌外植体接种至液体浅层愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养得到状态良好的愈伤组织；（4）丛生芽诱导增殖：将步骤（3）中获得的良好的愈伤组织接种到固液双层丛生芽培养基上进行丛生芽增殖培养；（5）生根培养及移栽：将步骤（4）中获得的丛生芽浸泡处理后接种到固体生根培养基上进行生根培养，然后将得到的生根苗炼苗后栽培到基质中进行生长得到五月瓜藤种苗；所述的步骤（1）中的所述外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条；所述的步骤（1）中，所述外植体预处理的方法为：将所述外植体离体后立即置于添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理3~5h，后置于2~8℃条件下保湿冷藏5~10 d；所述的步骤（3）中所述培养基的配方为WPM或MS+1.0~4.0mg/L 2,4‑D+0.05~0.5mg/L NAA+0.1~1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；所述液体浅层厚度为0.5~3cm；所述的步骤（4）中所述固液双层丛生芽培养基中的液体培养基的配方为WPM或MS+1.0~4.0 mg/L 6‑BA+0.02~0.5mg/L NAA+2.0mg/L KT+0.1~1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0，厚度为0.2~1cm；所述固液双层丛生芽培养基下层为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，上下层培养基组成一致，从而形成固液双层培养基；所述的步骤（5）中生根培养及移栽中，首先将丛生芽放入到添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中浸泡1~2h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基的配方为1/2MS+1.0~2.0 mg/L IBA+0.01~0.1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；所述的步骤（5）中获得的生根苗炼苗后栽种到泥：珍珠岩=2~5:1的基质中，保持适度遮阴和70%~80%的湿度进行栽培。