[发明专利]基于pH计的酶联免疫吸附测定方法

摘要

本发明公开了一种基于pH计的酶联免疫吸附测定方法。该方法通过在酶标板中进行抗原-抗体特异性免疫反应，捕获样本中的分析物抗原或抗体，随后引入葡萄糖氧化酶-葡萄糖生物催化反应，并使用pH计量测含有萄糖酸的混合产物溶液的pH值，pH值的大小与样本中分析物的浓度呈负相关，即完成基于pH计的酶联免疫吸附测定。本发明使用廉价的pH计进行信号读取，降低了定量分析的成本，它通过利用微米或纳米颗粒固定葡萄糖氧化酶来放大单个抗原-抗体结合反应的响应信号，在保持传统ELISA法良好特异性的同时，通过使用微米或纳米颗粒增加葡萄糖氧化酶的固定化量，放大单个抗原-抗体特异性结合反应的响应信号，提高了检测灵敏度。

主权项

一种基于pH计的酶联免疫吸附测定方法，其特征在于具体步骤为：步骤一，在酶标板中包被单克隆抗体或抗原；步骤二，以牛血清白蛋白为封闭剂进行封闭；利用抗原‑抗体特异性免疫反应，捕获样本中的分析物抗原或抗体，并进一步结合生物素标记的抗体或二抗；步骤三，利用生物素‑亲和素特异性反应，将链霉亲和素与葡萄糖氧化酶同时标记的微米或纳米颗粒捕获到酶标板表面；步骤四，加入葡萄糖与葡萄糖氧化酶进行催化反应；步骤五，最后使用pH计量测含有萄糖酸的混合产物溶液的pH值，pH值的大小与样本中分析物抗原或抗体的浓度呈负相关，即完成基于pH计的酶联免疫吸附测定；所述的将链霉亲和素与葡萄糖氧化酶同时标记的微米或纳米颗粒捕获到酶标板表面，是根据不同的目标分析物对象，采用的抗原‑抗体特异性免疫反应模式为双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法、竞争法和捕获包被法中的一种；所述pH计为台式pH计、便携式pH计和便携式pH笔中的一种。