[发明专利]一种pH释放型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种pH释放型免疫传感器的制备方法及应用，属于新型生物传感检测技术。具体是把氧化还原探针硫堇封装在介孔二氧化硅-Au的介孔内，得到检测抗体标记物—介孔二氧化硅-Au，制备一种检测肿瘤标志物的夹心型电化学免疫传感器。为检测肿瘤标志物开辟了新的检测方法。

主权项

一种pH释放型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）依次用1.0、0.3、0.05 µm的三氧化二铝抛光粉对磁电极进行抛光处理，用超纯水清洗干净，然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，在‑0.2~0.6 V电位下扫描，使峰电位差小于110 mV；（2）取6 µL、0.5~3 mg/mL的氨基化四氧化三铁溶液滴加到电极表面，室温下晾干；（3）滴加3 µL的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶液与N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶液的混合液到电极表面，再继续滴加6 µL、5~10 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体，4℃下晾干，超纯水冲洗；所述1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶液与N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶液的浓度均为0.1 mol/L，其体积比为1~4 : 1；（4）用3 µL、质量分数为0.5~1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，4℃下晾干，超纯水冲洗；（5）将6 µL的一系列不同浓度的肿瘤标志物溶液滴加到电极表面，用于和抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，超纯水冲洗；（6）继续滴加4~6 µL检测抗体孵化物—介孔二氧化硅‑Au‑Ab₂溶液至电极表面，置于4℃冰箱中孵化1 h，清洗后，晾干，制得一种pH释放型免疫传感器。