[发明专利]一种检测转基因植物中靶标siRNA池的方法

摘要

本发明公开了一种检测转基因植物中靶标siRNA池的方法，其包括：以目标基因DNA为模板制备DIG-UTP标记的反义RNA链：反应体系包括：UTP、ATP、GTP、CTP，DIG-UTP、RNA聚合酶缓冲液、目标DNA、RNA聚合酶、去离子水，10～50℃反应0～24小时；去除目标DNA；沉淀RNA；离心，弃上清，溶解RNA沉淀，获得含有DIG-UTP标记的反义RNA链；通过Northern杂交，以DIG-UTP标记的反义RNA链为探针检测转基因植物中靶标siRNA池。本发明具有高度特异性，且操作简单，成本低，可大幅度减少标靶siRNA池的检测成本。

主权项

一种检测转基因植物中靶标siRNA池的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)以目标基因DNA为模板制备DIG‑UTP标记的反义RNA链：①反应体系包括：UTP、ATP、GTP、CTP，DIG‑UTP、RNA聚合酶缓冲液、目标DNA、RNA聚合酶、去离子水，10～50℃反应0～24小时；②然后，反应体系中加入DNA酶，10～50℃反应去除反应体系中的目标DNA；③再，加入去离子水和氯化锂溶液，‑20～0℃中沉淀RNA；④离心，弃上清，加去离子水溶解RNA沉淀，获得含有多个DIG‑UTP标记的高纯度目标反义RNA链；2)以DIG‑UTP标记的反义RNA链为探针检测转基因植物中靶标siRNA池：①将目标基因RNA进行聚丙烯酰胺胶电泳，然后，将目标基因RNA从聚丙烯酰胺胶中转到硝酸纤维素滤膜上，烤干滤膜；②然后，将烤干后的滤膜预杂交后，加入步骤1)获得的DIG‑UTP标记的高纯度目标反义RNA链，杂交过夜；③再，将滤膜清洗，显色、曝光、成像。