[发明专利]一种细菌芽胞功能微球的制备方法与应用

摘要

本发明属于生物材料制备领域，涉及一种细菌芽孢功能微球的制备方法与应用。利用新的生化方法处理细菌芽孢，制备高分散性的功能微球，然后将纳米材料固定在处理后的芽孢表面，将其应用于不同的领域。发明的要点在于，收集培养3～10天浓度为108～1011cfu的细菌芽孢，经离心洗涤和超声处理，用胰蛋白酶液和去芽孢衣处理液处理，最后得到除去孢外壁和芽孢衣的表面光滑的细菌芽孢微球，用此微球负载金属纳米颗粒。本发明制备的功能微球机械刚性结构更加稳定，负载的纳米材料不易脱落，作为载体的性能更加稳定可靠。本发明还公开了所制备的芽孢微球在动物免疫检测材料中的应用。

主权项

1.一种利用细菌芽胞制备功能微球的方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)配制LB液体培养基和LB固体培养基，将所述的培养基在121℃灭菌30min，用LB液体培养基活化细菌芽胞杆菌4～6h，当OD600＝0.6时，向每个培养皿加入200uL活化好的菌液并涂布均匀，然后在37℃培养箱中培养，收集培养3～10d的芽胞，用去离子水洗涤并离心，重复2～5次；(2)用去离子水将芽胞重悬，将108～1011个/mL的芽胞分装在离心管中，调整超声波细胞破碎仪的输出功率至220～450W，振幅为0％～70％，超声处理10～30min，所述的超声处理为间歇操作即在冰浴中超声3min，停3min；(3)将上步处理的芽胞用去离子水反复离心洗涤，之后将所得的芽胞在以pH 3的盐酸溶液或pH 7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液配制的含有0.5～2.0％的胰蛋白酶溶液中处理，胰蛋白酶溶液处理完成后，离心去除酶液，并反复洗涤3～5次；(4)配制与芽胞悬液等体积的去芽胞衣处理液并将芽胞重悬，在37～80℃水浴中搅拌处理0.5～4h，将处理后的芽胞用适量的去离子水重悬，得到芽胞微球；(5)将制备好的金属纳米颗粒与制备好的浓度范围为108～1010个/mL的芽胞悬液混合后于120～140rpm，37℃，恒温摇床中振荡孵育0.5～2h，使金属纳米颗粒均匀吸附在芽胞表面，形成芽胞@金属纳米颗粒的复合微球，然后用去离子水反复离心洗涤3次，去除未吸附的金属纳米颗粒；其中磷酸盐缓冲液为：磷酸二氢钾0.24g，十二水合磷酸氢二钠3.58g，氯化钠8.0g，氯化钾0.2g去芽胞衣处理液为：0.1M NaOH,0.1M NaCl,1％十二烷基硫酸钠，0.1M二硫代苏糖醇。