[发明专利]一种两核苷酸合成测序分析多模板PCR产物的方法

摘要

本发明公开了一种两核苷酸合成测序分析多模板PCR产物的方法。该方法对同一PCR产物均匀分成至少两份，进行两核苷酸合成测序，每个测序反应得到包括两核苷酸种类及其核苷酸合成数目的测序编码信息，选择三组中至少两组不同两核苷酸合成循环测序分别得到的至少两组编码信息进行解码，最后通过关联分析确定PCR产物的不同DNA模板含量。本发明拓宽了单核苷酸合成测序的分析范围，适合多模板PCR产物、以及混合样本PCR产物的序列分析，可以直接测定样本中各个DNA模板的比例，也可以用于从大规模样本中寻找、筛选核酸标志物。

主权项

一种两核苷酸合成测序分析多模板PCR产物的方法，其特征在于，该方法的步骤包括：1）DNA提取；2）PCR扩增；3）测序；4）关联分析；所述步骤3）的具体方法包括以下步骤：3‑1）制备单链DNA模板：将PCR扩增产物均匀分成2～3份，分别与链霉亲和素包裹的磁珠反应，生物素修饰的DNA链固定到所述磁珠上，在0.05‑0.2 M NaOH溶液下变性；将未固定的另一条DNA链清除；然后用洗液洗涤，得到固定的单链DNA模板；3‑2）测序引物杂交：将测序引物与上述单链DNA模板在杂交反应体系中，70‑80℃下放置5‑10 min，自然冷却至室温，完成杂交得到杂交产物；3‑3）测序：配备测序反应体系，与所述步骤3‑2）得到的杂交产物混合，选择三组（(dATPαS+dGTP)/(dCTP+dTTP),(dATPαS+dCTP) / (dGTP+dTTP),(dATPαS+dTTP)/(dCTP +dGTP)）中可能合成循环测序的2～3组进行测序，得到2～3组测序编码测序信息。