[发明专利]免预培养高效菊苣遗传转化方法

摘要

本发明提供了一种免预培养高效菊苣遗传转化方法。本发明采用子叶组织作为外植体，与传统外植体真叶相比，本发明采用的子叶外植体可以由消毒的种子萌发而来，而子叶由于有种皮保护，因此，可以采用酒精和84消毒液灭菌方法，同时也保护了实验操作者和环境免受升汞的危害。本发明简化了实验步骤、缩短了实验时间、极大地减少了实验成本。本发明外植体准备只要3‑5天,而且不需要经过预培养；由于子叶细胞贮存了丰富的营养物质，因此利用黑暗条件抑制子叶细胞分裂，在恢复光照条件后其利用自身营养物质迅速分裂的特点，不需要对外植体预培养可直接用于遗传转化，极大的减少了人力、物力与时间成本。

主权项

1.一种免预培养高效菊苣遗传转化方法，其特征在于：将消毒好的菊苣种子播种于种子培养基中，完全遮光培养3‑5天；取分生能力旺盛的子叶组织来制备外植体；将制备的外植体直接用农杆菌侵染，进行农杆菌转化，获得浸染好的外植体；将浸染好的外植体采用共培养培养基在光照条件下进行共培养，获得共培养外植体；将共培养外植体清洗后，采用愈伤诱导培养基在光照条件下进行诱导愈伤，获得愈伤外植体；将愈伤外植体采用分化培养基在光照条件下进行诱导再生芽，使外植体的愈伤组织上产生再生植株；将再生植株从愈伤组织上切下后，采用生根培养基在光照下进行生根，直到根系发育完成；炼苗5‑7天后，将无菌苗移栽至基质中；所述的种子萌发培养基是由1/2MS、10g/L蔗糖及8g/L琼脂组成；共培养培养基由MS培养基、10g/L蔗糖、8g/L琼脂、0.01mg/L TDZ及1mg/L IAA组成；愈伤诱导培养基是由MS培养基、15g/L蔗糖、10g/L琼脂、2mg/L 6‑BA、1mg/L IAA、300mg/L头孢霉素及25mg/L卡那霉素组成；分化培养基是由MS培养基、15g/L蔗糖、10g/L琼脂、1mg/L 6‑BA、1mg/L IAA、300mg/L头孢霉素及25mg/L卡那霉素组成；生根培养基是由MS培养基、10g/L蔗糖、7g/L琼脂、1mg/L NAA及300mg/L头孢霉素组成。