[发明专利]一种降低总双乙酰的啤酒酵母的选育方法

摘要

本发明属于一种降低总双乙酰（TVDK）的啤酒酵母选育方法。该法综合运用过量双乙酰及D-缬氨酸（D-Val）对酵母生长代谢的抑制作用。先将出发菌株发酵液在基础麦汁琼脂培养基上生长，然后将单菌落依次点接于含有适量D-Val和过量双乙酰的麦汁琼脂培养基中进行选择性培养，通过比较与发酵试验，得到低TVDK啤酒酵母菌株。检测实验菌株TVDK含量，其正突变率可达到73.33%，降低率最高值为57.62%。该方法操作简单，结果准确稳定，对啤酒企业克服双乙酰“反弹”，生产优质啤酒具有很强的理论和实践意义。

主权项

一种降低总双乙酰（TVDK）的啤酒酵母选育方法，包括以下步骤：1)将出发菌株发酵液稀释至适当浓度涂布于麦汁琼脂平板中，28℃恒温培养24h；2)分离并保藏单菌落，用无菌牙签将其分别依次点接入含有500mg/LD‑Val（A培养基）及50mg/L双乙酰（B培养基）的麦汁琼脂平板中，28℃恒温培养3‑4d；3)每隔24h观察菌落生长情况，对D‑Val敏感的菌株具有双乙酰前体物含量低的特点，而耐高浓度双乙酰的菌株具有快速还原双乙酰的特性,因此，挑选在A培养基上生长缓慢且在B培养基上生长良好的菌株作为实验菌株进行发酵试验；4)发酵结束后，将过滤后的发酵液及啤酒标样于60℃下水浴90min，然后置于20℃水浴锅中冷却，参照《啤酒分析方法》GB/T4928‑2008蒸馏双乙酰并利用邻苯二胺—分光光度法检测样品及对照吸光值，计算得到实验菌株TVDK含量,TVDK计算公式如下：式中：TVDK——样品的总双乙酰含量，单位为毫克每升（mg/L）；A₃₃₅——样品在波长335nm下，用10mm石英比色皿测得的样品检验的吸光度；A_bl——蒸馏水在波长335nm下，用10mm石英比色皿测得的空白检验的吸光度；A_st——1%双乙酰标准溶液在波长335nm下，用10mm石英比色皿测得的校准的吸光度;0.625——标准品中双乙酰含量，单位为毫克每升（mg/L）。