[发明专利]一种马铃薯化学消毒组培方法

摘要

本发明涉及一种马铃薯化学消毒组培方法。马铃薯的化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、茎尖诱导增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的马铃薯化学消毒组培方法，利用化学试剂达到灭菌或抑菌的目的，在配制培养基的过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了马铃薯组培环节；并且操作简单，只要按不同的培养基配方配制即可；实用性强，推广性好，还可以有效降低马铃薯的组培成本，一般可降低成本10％以上。

主权项

一种马铃薯化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、茎尖诱导增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L乳酸链球菌素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：茎尖诱导增殖培养基为MS+1.0～3.0mg/L 6‑BA+0.1～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；壮苗培养基为：MS+0.1～0.5mg/L 6‑BA+0.1～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.2～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌吟；所述NAA，指〆‑萘乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)茎尖诱导增殖培养：取发芽种薯的带芽块茎进行变温处理，每天40℃处理4h，25℃处理20h，如此处理4周；从顶芽或侧芽取茎尖，先剥去大叶片，用自来水冲洗20～30min，在体积比为75％的酒精中浸泡30s，用重量比为0.1％的升汞溶液消毒10min，取出后，用无菌水冲洗3次，然后在无菌条件下剥取带1～2个叶原基、长0.3～0.7mm的茎尖，接种于茎尖诱导增殖培养基上培养30d，获得大量的丛生芽；将丛生芽切成长1.0～1.5cm、带单个腋芽的茎段，再次转入诱导增殖培养基中，逐步发育成不具根的幼苗，每30d转接一次，大量增殖不具根的幼苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为2000～3000lx；(4)壮苗培养：将增殖后的不具根的幼苗接种到壮苗培养基上，培养4周成为不具根的小苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为2000～3000lx；(5)生根培养：取壮苗培养至6～8cm高、茎粗不小于0.3cm的不具根的小苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整植株；培养室温度为25℃，光照16h，光照强度为2000～3000lx；(6)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后移栽至大棚的耕作土中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃。