[发明专利]一种产L-肉碱的大肠杆菌基因工程菌及构建方法和应用有效
| 申请号： | 201510278530.7 | 申请日： | 2015-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN104928225B | 公开（公告）日： | 2018-06-12 |
| 发明（设计）人： | 黄娇芳;孙立洁;陈祥松;袁丽霞;王纪;吴金勇;朱薇薇;王刚;姚建铭;史吉平;魏东 | 申请（专利权）人： | 武汉中科光谷绿色生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 唐正玉 |
| 地址： | 430074 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种产L‑肉碱的大肠杆菌基因工程菌的构建方法和用途。所述基因工程菌是通过将编码巴豆甜菜碱转化为L‑肉碱的三个关键基因caiB、caiC和caiD连同转运子编码基因caiT和正调控子caiF一起转入大肠杆菌中过表达，通过厌氧启动子控制或IPTG诱导L‑肉碱合成相关基因的表达，同时删除大肠杆菌自身的编码异柠檬酸脱氢酶磷酸酶/激酶的aceK基因。基因工程菌经产酶培养后，收集菌体作为全细胞酶源，直接转化巴豆甜菜碱生成L‑肉碱，经转化后，L‑肉碱产量最高可达30g/L以上，摩尔转化率最高为42％，产量和转化率比野生株提高了60倍以上，达到国内报道的生物法制备的领先水平。本发明的基因工程菌对底物的转化效率高，酶反应工艺简单，生产原料成本低廉，节约资源，无污染。 | ||
| 搜索关键词： | 肉碱 基因工程菌 大肠杆菌基因工程菌 大肠杆菌 巴豆甜菜碱 构建 异柠檬酸脱氢酶 合成相关基因 摩尔转化率 启动子控制 编码基因 关键基因 节约资源 全细胞酶 生产原料 生物法制 收集菌体 正调控子 直接转化 转化效率 激酶 磷酸酶 酶反应 野生株 转运子 产酶 底物 厌氧 转化 删除 转入 基因 应用 | ||
【主权项】：
一种产L‑肉碱的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌将大肠杆菌野生株BW25113基因组上编码异柠檬酸脱氢酶磷酸酶/激酶的aceK基因删除得到大肠杆菌突变株BWΔaceK，选择厌氧诱导的质粒pET‑A，在多克隆位点的NdeI/KpnI酶切位点插入caiBCD片段，得到第一个过表达质粒pEH‑caiBCD；将caiT插入到pACYCD的NdeI/XhoI位点，同时将caiF插入到同一pACYCD的Hind III/EcoR I位点，得到第二个过表达质粒pACYCD‑caiT‑caiF；将两个过表达质粒pEH‑caiBCD和pACYCD‑caiT‑caiF同时转入大肠杆菌突变株BWΔaceK中，获得产L‑肉碱的大肠杆菌基因工程菌BWΔaceK/(pEH‑caiBCD+pACYCD‑caiT‑caiF)；从大肠杆菌野生株BW25113的基因组上扩增caiBCD片段，正向引物序列为：5’‑GGGCATATGGATCATCTACCCATGCC‑3’；反向引物序列为：5’‑ATTGGTACCCAACCGTGAGCTATTACGCC‑3’。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉中科光谷绿色生物技术有限公司，未经武汉中科光谷绿色生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201510278530.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
