[发明专利]一种淡水珍珠蚌噬菌体型溶菌酶重组蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种淡水珍珠蚌噬菌体型溶菌酶重组蛋白的制备方法，该方法通过设计的特异性引物，提取三角帆蚌的总RNA，用反转录及PCR技术对噬菌体型溶菌酶基因进行克隆测序，再进行原核表达载体pET-30a(+)-LYZPh的构建，转化大肠杆菌BL21（DE3），得到重组工程菌。将工程菌在LB培养基中高密度培养，用IPTG诱导后重组基因得到大量表达。产物经亲和层析柱，得到纯化的噬菌体型溶菌酶。本发明能够快速获得表达量较高的噬菌体型溶菌酶的重组蛋白，弥补了淡水珍珠蚌噬菌体型溶菌酶蛋白的研究空白，可为研究噬菌体型溶菌酶蛋白和相关溶菌酶产品开发提供材料。

主权项

一种淡水珍珠蚌噬菌体型溶菌酶重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：设计含有酶切位点引物；利用设计的含有酶切位点引物将噬菌体型溶菌酶基因进行PCR扩增，并通过酶切、转化、筛选构建原核表达载体pET‑30a(+)‑LYZPh；再将原核表达载体pET‑30a(+)‑LYZPh转化至大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG进行目的基因的诱导表达，获得含溶菌酶重组蛋白的菌液；通过镍离子亲和柱层析对上述菌液进行纯化，用聚乙二醇 8000对重组蛋白进行浓缩后用15%SDS‑PAGE电泳检测目的蛋白的纯化效果。