[发明专利]羊水间充质干细胞的原代分离培养方法有效
| 申请号： | 201510289599.X | 申请日： | 2015-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN104830764B | 公开（公告）日： | 2018-04-13 |
| 发明（设计）人： | 葛啸虎;陈海佳;王一飞;卢瑞珊;王小燕;李平;马岩岩 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及羊水间充质干细胞的原代分离培养方法。本发明提供的方法，利用差速贴壁原理，在适宜条件下，使内皮细胞先贴壁生长，而此时间充质干细胞尚未贴壁。本发明准确控制培养时间，待内皮细胞贴壁完成后，转移包含羊水间充质干细胞的培养液。对培养液进行传代培养后获得羊水间充质干细胞。本发明提供的方法操作简单，无需更多的仪器，且无需人为刮除的操作，避免了细胞的损伤和污染。检测结果表明，步骤1中获得的培养液中所包含的羊水间充质干细胞的活力不低于89.28％，经传代3代，流式细胞检测结果表明，其表面抗体仍符合干细胞特性，未见分化趋势。 | ||
| 搜索关键词： | 羊水 间充质 干细胞 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
羊水间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，包括：步骤1：明胶铺板后接种羊水组织细胞，培养11h～13h后转移培养液；步骤2：将所述培养液培养至细胞融合率不低于85％，获得初步纯化的细胞；步骤3：将所述初步纯化的细胞重悬，培养3h～5h后，更新培养基，继续培养至细胞贴壁，弃除培养液，获得羊水间充质干细胞；步骤1中所述接种的羊水组织细胞密度为5×105个/mL；步骤1中所述培养的培养基为Lonza完全培养基；步骤1中所述培养的温度为37℃，5％CO2、湿度为95％；步骤3中所述重悬至细胞密度为1×105个/mL；步骤3所述重悬采用Lonza完全培养基；步骤3中所述培养的温度为37℃，5％CO2、湿度为95％。
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