[发明专利]一种桑黄素D的制备方法

摘要

本发明公开了一种桑黄素D的制备方法，利用火木层孔菌制备菌丝悬液，加入到亚硝酸钠溶液和醋酸缓冲液的混合液中进行诱变，将诱变液在固体培养基上培养，挑取优势菌株种至液体发酵培养基中，收集发酵液，经过滤后水洗、95％乙醇洗脱并收集醇提部分，旋蒸、干燥既得。本发明方法操作简单，副产物少，为桑黄素D的工业化生产奠定了基础。

主权项

一种桑黄素D的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)菌悬液制备火木层孔菌菌株活化后，置于28℃培养箱中培养，挑选菌落形态较大、生长状态良好的菌株，挑取菌丝置于盛有无菌玻璃珠与生理盐水的锥形瓶中，充分震荡制备菌丝悬液；2)亚硝酸诱变取菌丝悬液2mL加入到1mL 0.005mol/L亚硝酸钠溶液和2mL、pH 4.4的醋酸缓冲液混合液中，28℃水浴诱变处理60min后，终止诱变；3)涂平板培养取终止液均匀涂布于固体培养基平板上，置于28℃培养箱中暗处培养；4)挑选菌斑数小于5的再生菌接种至斜面培养基中继续培养，连续挑取优势菌株培养三代至菌体稳定增殖；5)将诱变后的优势菌株接种至液体发酵培养基中，于28℃，180rpm震荡培养21天，收集发酵液，用三层纱布滤除菌丝体，发酵液过大孔树脂柱，经水洗、95％乙醇洗脱并收集醇提部分，旋蒸、干燥。