[发明专利]一种体外胶质疤痕形成模型及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201510292819.4 | 申请日： | 2015-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN104911140B | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 王晓冬;李奕;谈玲;陈雪;林巍巍;陈颖;潘静莹;陆冰;缪玲玉 | 申请（专利权）人： | 南通大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/079;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海顺华专利代理有限责任公司 31203 | 代理人： | 陆林辉 |
| 地址： | 226019*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学的技术领域，本发明提供了一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，包括将纯化后的脑(脊)膜纤维细胞和星形胶质细胞以一定的数量比分别种植于腔室载玻片上相邻的小室内，添加培养基进行培养；当细胞贴壁生长后，再将小室间的隔板移除，继续培养；当观察到脑(脊)膜纤维细胞和星形胶质细胞这两种细胞生长并相互靠拢时，用锐器在两种细胞交界处作机械划痕损伤细胞，最终形成类胶质疤痕的结构。本发明获得的体外胶质疤痕形成模型能够较好地模拟体内胶质疤痕形成的整个过程，并出现相应的胶质疤痕形态结构及相关细胞生物学与分子生物学的变化，为胶质疤痕形成的机制研究及相关治疗研究提供体外细胞水平的实验模型。 | ||
| 搜索关键词： | 胶质疤痕 细胞 细胞生物学 星形胶质细胞 膜纤维 构建 种体 细胞贴壁生长 隔板 分子生物学 机械划痕 机制研究 实验模型 体外细胞 细胞生长 形态结构 培养基 锐器 交界处 数量比 载玻片 腔室 体外 小室 移除 靠拢 损伤 室内 体内 观察 治疗 应用 种植 研究 | ||
【主权项】：
1.一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，所述的构建方法包括以下步骤：A.将纯化后的脑脊膜纤维细胞和星形胶质细胞以数量比为3:4的比例分别种植于腔室载玻片上相邻的小室内，小室底部的载玻片已预先用50‑75μg/ml的L‑多聚赖氨酸包被，每个小室内为100μl～300μl的细胞悬液，脑脊膜纤维细胞和星形胶质细胞细胞密度为1×104/ml～8×105/ml；B.0.5小时后将小室之间的隔板移除，总量添加5ml含10％FBS的DMEM/F12培养基，于37℃，5％CO2培养箱培养2天以上；C.当观察到脑脊膜纤维细胞和星形胶质细胞这两种细胞相互靠拢时，显微镜下用锐器在两种细胞交界处作机械划痕，所述的机械划痕类似“丰”字，换含10％FBS的DMEM/F12培养液后继续培养，培养6天以上形成类胶质疤痕的结构。
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