[发明专利]基于D‑丙氨酸缺陷型筛选标记的表达D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法有效
| 申请号： | 201510294626.2 | 申请日： | 2015-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN104894047B | 公开（公告）日： | 2018-03-30 |
| 发明（设计）人： | 江波;沐万孟;何伟伟;张涛 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12N15/61;C12P19/02;C12R1/125 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙)32104 | 代理人： | 时旭丹,张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 基于D‑丙氨酸缺陷型筛选标记的表达D‑阿洛酮糖 3‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。以枯草芽孢杆菌1A751为出发菌株，敲除其染色体上D‑丙氨酸消旋酶基因(dal)得到D‑丙氨酸缺陷型的1A751(dal‑)；将梭状芽胞杆菌ATCC 35704的DPE酶基因作亲本，在其上游融合P43启动子构建成P43‑DPE，将其构建至质粒pUB110(NCBI‑Gene ID9507338)中得到pUB‑P43‑DPE，将pUB‑P43‑DPE上的抗生素抗性基因Kan和Blm用dal替代，构建成pUB‑P43‑DPE‑dal；再转化进1A751(dal‑)中，得重组枯草芽孢杆菌1A751‑pUB‑P43‑DPE‑dal，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.001，保藏编号CCTCC NOM 2015257。其发酵液总酶活达16U/mL，具有重要的工业应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 丙氨酸 缺陷 筛选 标记 表达 阿洛酮糖 差向异构 重组 枯草 芽孢 杆菌 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基于D‑丙氨酸缺陷型筛选标记的表达D‑阿洛酮糖 3‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌，其组成为1A751‑pUB‑P43‑DPE‑dal，分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2015257。
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