[发明专利]一种检测副溶血弧菌同源重组细胞自杀质粒丢失的引物对及方法有效
| 申请号： | 201510295125.6 | 申请日： | 2015-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN104911263B | 公开（公告）日： | 2018-01-16 |
| 发明（设计）人： | 俞盈;吴学谦;陆建良;徐娟;许海顺;么春艳 | 申请（专利权）人： | 浙江省医学科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310013 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测副溶血弧菌同源重组细胞自杀质粒丢失的引物对及方法，该引物包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。检测方法包括以下步骤(1)提取待检样品DNA；(2)建立PCR反应体系，进行PCR扩增；(3)扩增产物的检测与判断。本发明引物对针对自杀质粒π蛋白依赖型复制起点R6K设计，特异性强，利用该引物对通过简单的PCR扩增即可检测副溶血弧菌同源重组细胞中自杀质粒是否丢失，操作简单，准确性高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 溶血 弧菌 同源 重组 细胞 自杀 质粒 丢失 引物 方法 | ||
【主权项】：
一种检测自杀质粒的方法，包括以下步骤：(1)提取待检样品的DNA；(2)建立PCR反应体系，进行PCR扩增；(3)扩增产物的检测与判断；如扩增产物中出现385bp的条带，则说明待检样品中具有自杀质粒，否则，说明待检样品中不具有自杀质粒；所述PCR扩增采用的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述自杀质粒为pYAK1；所述待检样品为副溶血弧菌同源重组细胞；PCR反应体系包括：PCR buffer终浓度为1×，Taq DNA polymerase 2.5U，dNTP各250μM，上下游引物各10μM；PCR反应条件为：95℃5min；94℃35s，45‑60℃30s，72℃30s，30个循环；72℃10min。
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