[发明专利]杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法

摘要

杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法，涉及一种松树离体培养不定芽诱导植株再生的方法。是要解决现有杂种落叶松组织培养器官发生困难、植株再生率低、不定芽诱导率低的问题。方法一、取经过预处理的杂种落叶松合子胚接种于培养基中，进行暗培养或光照培养至出现愈伤组织；二、将愈伤组织接种于培养基中光照培养，至长出不定芽；三、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入培养基中，3周之后继代培养一次，进行不定芽伸长，转入培养基中进行不定芽的抽茎；四、将抽茎的不定芽转入培养基，光照培养以实现不定芽的生根。本发明方法不定芽诱导率为87.73％，抽茎率达75.96％，生根率达45％。用于杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生。

主权项

杂种落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、取经过预处理的杂种落叶松合子胚接种于BM改良培养基+2.0～2.5mg/L噻苯隆+1g/L肌醇+450mg/L谷氨酰胺+500mg/L水解酪蛋白+6.5g/L琼脂+30g/L蔗糖的培养基中，进行暗培养或光照培养至出现愈伤组织；二、将愈伤组织接种于BM改良培养基+2.0～2.5mg/L噻苯隆的培养基中，在光照强度为33～36μmol·m‑2·s‑1，温度为23～25℃的环境中进行光照培养，至长出不定芽；三、将带有不定芽的愈伤组织切成块转入BM改良培养基+0.1～1.0mg/LTDZ+0～0.04mg/L NAA的培养基中培养，在光照强度为32～38μmol·m‑2·s‑1，温度为22～24℃的环境中进行光照培养，3周之后继代培养一次，进行不定芽伸长，当不定芽伸长至2～3cm，将其转入BM改良培养基+0.05～1.0mg/L6‑BA+0.05～1.0mg/LNAA的培养基中培养，进行不定芽的抽茎；四、将抽茎的不定芽转入1/2BM改良培养基+0.5mg/L IBA+1.0mg/L NAA的培养基，控制培养基中蔗糖浓度为20g·L‑1，在光照强度为32～38μmol·m‑2·s‑1，温度为22～24℃的环境中，进行光照培养以实现不定芽的生根；所述BM改良培养基的组成为：NH4NO3 200.0mg·L‑1、KNO3 909.9mg·L‑1、KH2PO4 136.1mg·L‑1、Ca(NO3)2·4H2O 236.2mg·L‑1、Mg(NO3)2·6H2O 256.5mg·L‑1、MgCl2·6H2O 101.7mg·L‑1、MgSO4·7H2O 246mg·L‑1、KI 4.15mg·L‑1、H3BO3 15.5mg·L‑1、MnSO4·4H2O 10.5mg·L‑1、ZnSO4·7H2O 14.688mg·L‑1、Na2MoO4·2H2O 0.125mg·L‑1、CuSO4·5H2O 0.1725mg·L‑1、CoCl2·6H2O 0.125mg·L‑1、FeSO4·7H2O 2.78mg·L‑1、Na2EDTA 3.73mg·L‑1、肌醇1000mg·L‑1、维生素B1 1.0mg·L‑1、维生素B6 1.0mg·L‑1、烟酸0.5mg·L‑1、甘氨酸2.0mg·L‑1和蒸馏水；步骤四所述1/2BM改良培养基的组成为：NH4NO3 100.0mg·L‑1、KNO3 454.95mg·L‑1、KH2PO4 68.05mg·L‑1、Ca(NO3)2·4H2O 118.1mg·L‑1、Mg(NO3)2·6H2O 128.25mg·L‑1、MgCl2·6H2O 50.85mg·L‑1、MgSO4·7H2O 123mg·L‑1、KI 4.15mg·L‑1、H3BO3 15.5mg·L‑1、MnSO4·4H2O 10.5mg·L‑1、ZnSO4·7H2O 14.688mg·L‑1、Na2MoO4·2H2O 0.125mg·L‑1、CuSO4·5H2O 0.1725mg·L‑1、CoCl2·6H2O 0.125mg·L‑1、FeSO4·7H2O 2.78mg·L‑1、Na2EDTA 3.73mg·L‑1、肌醇1000mg·L‑1、维生素B1 1.0mg·L‑1、维生素B6 1.0mg·L‑1、烟酸0.5mg·L‑1和甘氨酸2.0mg·L‑1。