[发明专利]多层级固定化乳糖酶的制备方法、该方法制得的多层级固定化乳糖酶及其应用

摘要

本发明公开了一种多层级固定化乳糖酶的制备方法，包括：1)多层级介孔硅材料的合成；2)固定化乳糖酶的制备：取100mg制得的多层级介孔硅材料，与乳糖酶液混合，振荡吸附0.5-3h，得到多层级固定化乳糖酶粗品；3)洗涤：用磷酸缓冲液多次冲洗所述多层级固定化乳糖酶粗品，得到多层级固定化乳糖酶。本发明还公开了用固定化乳糖酶制备低聚半乳糖的方法。本发明通过合成多层级介孔硅材料，将乳糖酶分子吸附于各层之间的空隙后，利用交联剂使乳糖酶分子交联，在保证多层级介孔硅材料每层孔道畅通的前提下，实现酶的高效固定化；通过简单的措施对反应不完全的交联剂进行处理，保障了固定化酶的高催化活性和稳定性。

主权项

一种多层级固定化乳糖酶的制备方法，包括以下步骤：1)多层级介孔硅材料的合成，包括以下步骤：A.在20～40℃条件下，将0.5～4g三嵌段共聚物溶解于150ml、0.5～2M的盐酸中，然后加入0.5～3g均三甲苯，并于室温搅拌1～8h；B.将步骤A所得溶液升温至40℃，加入5～20g硅前驱体，连续搅拌12～48h后，于100℃密封静置老化12～48h；C.将固相和液相分离，然后将分离后的固相于400‑600℃碳化1～6h，得到多层级介孔硅材料；2)固定化乳糖酶的制备：取100mg制得的多层级介孔硅材料，与2ml、浓度80‑150mg/ml的乳糖酶液混合，在150‑300r/min的转速下，振荡吸附0.5‑3h，然后离心分离，得到多层级固定化乳糖酶粗品；3)洗涤：用浓度为0.01‑0.5M、pH值为7.0‑10.0的磷酸缓冲液多次冲洗多层级固定化乳糖酶粗品，得到多层级固定化乳糖酶。