[发明专利]一种提高三七组培苗皂苷产量的方法

摘要

本发明提供一种施用茉莉酸甲酯提高三七组培苗皂苷产量的方法，包括三七组培苗快繁体系的建立、三七组培苗施加茉莉酸甲酯、栽培三七施加茉莉酸甲酯步骤。本方法简便易行，可在短期内形成大量优良三七快繁苗，具有繁殖速度快、周期短等优点；外施微量茉莉酸甲酯能在5‑10日内提高三七总皂苷产量15倍，各主要单体皂苷产量提高2‑5倍。此发明能有效地提高三七皂苷的产量，固体培养法繁育三七组培苗，无需昂贵的发酵设备、投资少；培养方法操作简单、繁育系数高、繁殖速度快、污染率低，不受季节限制，能有效降低三七皂苷的生产成本，对三七皂苷大规模生产具有实际指导意义。

主权项

一种提高三七组培苗皂苷产量的方法，包括三七组培苗快繁体系的建立、三七组培苗施加茉莉酸甲酯、栽培三七施加茉莉酸甲酯步骤，其特征在于：所述的三七组培苗快繁体系的建立步骤是用固体培养法诱导三七愈伤组织、丛生芽、组培苗，确定三七组培苗快繁条件，建立三七组培苗快繁体系，获得三七组培苗；所述诱导三七愈伤组织步骤，是将三七幼嫩叶片、叶柄，经常规灭菌后接种在以B5为基本培养基，添加不同浓度和组合的NAA，KT和2,4‑D培养基中进行三七愈伤组织诱导，所述NAA，KT和2,4‑D浓度分别设置为0.1‑1.5mg/L，0.5‑2.0mg/L，1.0‑3.0mg/L；将诱导后的愈伤组织接种在MS为基本培养基，添加6‑BA0.2‑2.0mg/L及IBA0.05‑0.5mg/L的固体培养基中进行三七丛生苗的诱导，将诱导出的三七丛生苗接种在以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的IBA0.5‑2.0mg/L、IAA0.5‑2.0mg/L和6‑BA0.01‑1.0mg/L的培养基中进行三七不定根的诱导；所述的三七组培苗施加茉莉酸甲酯步骤，是用20％的乙醇溶解茉莉酸甲酯，配制成50mmol/L的乙醇母液，并用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯母液添加到灭菌并冷却至35±5℃的固体培养基中，使茉莉酸甲酯最终浓度为50–400μmol/L，固体培养基配比为MS+6‑BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L，冷却至常温；然后将三七组培苗快繁体系的建立步骤所得的三七组培苗转接在上述添加了茉莉酸甲酯母液的培养基中，置于相对湿度60～66％、光照强度30μmol m‑2s‑1，光照/黑暗8h/16h，温度23±2℃条件下培养，于培养后的2，5，10，15，30天进行采样分析，采集的三七组培苗全株，采用UV和HPLC法进行三七总皂苷和单体皂苷产量检测；所述的栽培三七施加茉莉酸甲酯步骤是将上述步骤所得的三七组培苗移栽至以不同材料为基质的苗床内，移栽8个月后，采用茉莉酸甲酯进行叶面喷施，用少量乙醇助溶，将茉莉酸甲酯原液配成50‑400μmol/L的溶液，喷洒于移栽8个月后的三七叶面，至叶面滴水为止，早、中、晚各喷施一次，于喷施后的2，5，10，15，30天采样采样进行三七总皂苷和主要单体皂苷产量分析。