[发明专利]一种重组人粒细胞刺激因子多肽的纯化方法

摘要

本发明涉及一种重组人粒细胞刺激因子多肽的纯化方法，该方法包括以下步骤：选用pPIC9K‑G‑CSF(15‑75)‑GS115工程菌做菌株进行发酵培养；发酵培养液12000rpm，离心10min，上清液过0.45μm滤膜；对过滤后上清进行疏水层析纯化处理，得到疏水层析产物；对疏水层析产物进行阴离子交换和凝胶过滤，最后所得的G‑CSF(15‑75)的纯度达到99％以上，比活性达到了1.5×10⁸IU/mg，为G‑CSF(15‑75)的工业化大生产奠定基础。

主权项

1.一种重组粒细胞集落刺激因子多肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1）选用pPIC9K‑G‑CSF15‑75‑GS115工程菌做菌株进行发酵培养；2）发酵培养液12000rpm，离心10min，上清液过0.45μm滤膜；3）对过滤上清进行疏水层析纯化处理，得到疏水层析产物；4）对疏水层析产物阴离子交换，得到阴离子交换液；5）对阴离子交换液进行凝胶过滤，得到重组人粒细胞集落刺激因子多肽；其中，步骤3）疏水层析柱填料为Phenyl Sepharose 6 Fast Flow high sub，疏水层析平衡缓冲液为10 mmol/L HAc‑NaAc，pH 5.0，加固体NaCl 调节电导率 50ms/cm；洗脱缓冲液为10 mmol/L Tris‑HCl，pH 8.5；步骤4）阴离子交换层析柱其柱填料为聚苯乙烯‑二乙烯苯SKI‑10，阴离子层析平衡缓冲液为10mmol/L Tris‑HCl，pH 8.5；洗脱缓冲液为100 mmol/L HAc‑NaAc，pH5.0；步骤5）凝胶过滤柱填料为Sephacryl s‑100HR，凝胶层析洗脱缓冲液为10 mmol/L HAc‑NaAc，pH 5.0。