[发明专利]利用SPR基因dsRNA抑制斜纹夜蛾生长发育和生殖的方法在审

专利信息
申请号: 201510307832.2 申请日: 2015-06-08
公开(公告)号: CN104928294A 公开(公告)日: 2015-09-23
发明(设计)人: 徐进;黄玲燕;俞虹;刘方涛;叶辉 申请(专利权)人: 云南大学
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/10;A01N57/16;A01P7/04
代理公司: 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 代理人: 杨宏珍
地址: 650091*** 国省代码: 云南;53
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摘要: 发明涉及一种利用SPR基因dsRNA抑制斜纹夜蛾生长发育和生殖的方法,属昆虫生理和植物害虫防治技术领域。本发明通过斜纹夜蛾幼虫和成虫取食SPR基因的dsRNA,导致SPR基因表达沉默,从而致使斜纹夜蛾幼虫生长发育受到抑制,进而死亡,也能够导致雌性成虫交配后不产卵或只产少量卵。进而抑制斜纹夜蛾生长发育和生殖。本发明的具体步骤包括:(1)、SPR基因RNAi目标片段选择及dsRNA制备,(2)、用SPR基因dsRNA抑制斜纹夜蛾生长发育和生殖。本发明的有益效果在于:利用取食SPR基因dsRNA的基因沉默技术来防治农业重要害虫斜纹夜蛾,能够显著抑制斜纹夜蛾的生长发育和生殖,为绿色防治该害虫提供了一个新的思路和技术。
搜索关键词: 利用 spr 基因 dsrna 抑制 斜纹 夜蛾 生长发育 生殖 方法
【主权项】:
一种利用SPR基因dsRNA抑制斜纹夜蛾生长发育和生殖的方法,其特征在于该方法的具体步骤如下:(1)、SPR基因RNAi目标片段选择及dsRNA制备根据NCBI数据库中登陆号为JX070670的斜纹夜蛾SPR基因的cDNA序列,通过siDirect version 2.0软件进行分析,找到一段最优RNAi目标片段,即JX070670的cDNA序列的1564 ‑1792碱基,长229bp,具体序列为:5’‑TAATTTCAAGCACTATAGTCGAAATTTTAGATTACTATATAGCAAACATTTTGATTCTTATAACCAATTTCTTTATCTTGGTCTCTTATCCTATTAATTTTGCTATTTACTGTGGTATGTCGAGGCAGTTTAGGGAGACGTTTAAAGAACTGTTCATTCGAGGAGCTGTTACTAGCCGTAAGAATGGCGGCTCTAGTAGATACTCCCTGGTCAACGGTCCAAGGACATG‑3’再根据这段长229bp的序列设计dsRNA制备引物一对:正向引物5’‑TAATACGACTCACTATAGGGCATAATTTCAAGCACTATAGTC‑3’,反向引物5’‑TAATACGACTCACTATAGGGCATGTCCTTGGACCGTTGAC‑3’, 其中下划线部分序列为T7启动子;用这段引物,以斜纹夜蛾总RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR获得目标基因片段,再以这一片段为模板采用试剂盒合成dsRNA;(2)、用SPR基因dsRNA抑制斜纹夜蛾生长发育和生殖a,斜纹夜蛾的人工饲养    斜纹夜蛾幼虫采用人工饲料在24~27℃,60~80%RH,光照:黑暗=14:10的条件下饲养;在蛹期将雌雄分开单独关养,羽化的成虫用10%蔗糖水喂养;在上述条件下幼虫期为15天,蛹期11天,成虫期12天;人工饲料为:玉米粉100g,黄豆粉100g,胡萝卜粉50g, 酵母粉30g,干酪素20g, 蔗糖20g,琼脂粉20g,水1000ml,100℃蒸1h ;b.dsRNA喂食     将dsRNA拌入人工饲料中,从0日龄幼虫开始,每天喂食一次,0‑2日龄每天每只喂0.1μg dsRNA, 3‑6日龄每天每只喂0.5μg dsRNA, 7‑15日龄每天每只喂2μg dsRNA;给0‑3日龄的成虫每天每只喂食约2μg dsRNA ,即将dsRNA 加入到 10%蔗糖水中以供取食;以喂食不添加dsRNA的饲料和糖水的幼虫和成虫为对照,通过各期生长发育、致死率、及产卵分析抑制生长发育和生殖。
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