[发明专利]血管内皮细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种血管内皮细胞的培养方法，1)将多能干细胞于培养基A中分化成中内胚层前体细胞；2)将中内胚层前体细胞于培养基B中分化成血管内皮细胞祖细胞；3)将血管内皮细胞祖细胞于培养基C中分化成血管内皮细胞；培养基A含DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶‑3抑制剂；培养基B含DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂；培养基C含DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子、表皮生长因子和成纤维细胞生长因子。该方法将多能干细胞分化形成血管内皮细胞。

主权项

1.一种血管内皮细胞的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括：1)将多能干细胞于培养基A中诱导分化形成中内胚层前体细胞；2)将所述中内胚层前体细胞于培养基B中诱导分化形成血管内皮细胞祖细胞；3)将所述血管内皮细胞祖细胞于培养基C中诱导分化形成血管内皮细胞；其中，所述培养基A含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶‑3抑制剂；所述培养基B含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂；所述培养基C含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子、表皮生长因子和成纤维细胞生长因子；其中，在所述培养基A中，所述DMEM培养基与F12培养基的体积比为1：1‑1：4，所述维生素C的浓度为1‑100μg/ml，所述胰岛素的浓度为1‑100μg/ml，所述激活素A的浓度为5‑100ng/ml，所述骨形成蛋白4的浓度为1‑100ng/ml，所述糖原合成酶激酶‑3抑制剂的浓度为1‑100μM，所述硒酸钠的浓度为1‑100μg/L，所述碳酸氢钠的浓度为100‑1000mg/L；在所述培养基B中，所述DMEM培养基与F12培养基的体积比为1：1‑1：4，所述维生素C的浓度为1‑100μg/ml，所述胰岛素的浓度为1‑100μg/ml，所述血管内皮生长因子的浓度为5‑100ng/ml，所述转化生长因子β信号通路抑制剂的浓度为1‑50μM，所述硒酸钠的浓度为1‑100μg/L，所述碳酸氢钠的浓度为100‑1000mg/L；在所述培养基C中，所述DMEM培养基与F12培养基的体积比为1：1‑1：4，所述维生素C的浓度为1‑100μg/ml，所述胰岛素的浓度为1‑100μg/ml，所述血管内皮生长因子的浓度为5‑100ng/ml，所述表皮生长因子的浓度为5‑100ng/ml，所述成纤维细胞生长因子的浓度为5‑100ng/ml，所述硒酸钠的浓度为1‑100μg/L，所述碳酸氢钠的浓度为100‑1000mg/L。