[发明专利]基于MassARRAY质谱平台Iplex分析的肺癌基因谱检测方法及试剂盒与应用

摘要

本发明公开一种基于MassARRAY质谱平台Iplex分析的肺癌基因谱检测方法及试剂盒与应用。该方法能检测肺癌13种驱动和耐药相关基因的99种热点变异位点，通过使用如SEQ ID NO.1～198所示的扩增引物进行扩增反应，接着消化反应，再使用如SEQ ID NO.199～297所示的延伸引物进行延伸反应，得到的产物进行MassARRAY质谱平台Iplex分析。依据该方法设计得到一款检测试剂盒，其具有如下优点：紧跟肺癌诊治国际前沿，考虑了欧美人群与亚洲人群基因谱的差异，检测位点多；价格较低；高通量，用时短；检测样本不限；高准确性与高敏感性。因此，该试剂盒在临床上应用推广的潜力大。

主权项

一种基于MassARRAY质谱平台Iplex分析的肺癌基因谱检测方法，其特征在于能检测肺癌13种驱动和耐药相关基因的99种热点变异位点，包括如下步骤：(1)设计如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.198所示的扩增引物和如SEQ ID NO.199～SEQ ID NO.297所示的延伸引物；(2)将如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.198所示的扩增引物分为12组，扩增引物名称末尾为P1‑F和P1‑R为第1组，扩增引物名称末尾为P2‑F和P2‑R为第2组，类推，分为12组；将分组后的扩增引物混合，得到12管扩增引物混合液；将如SEQ ID NO.199～SEQ ID NO.297所示的延伸引物进行分组，延伸引物名称末尾为E1的延伸引物混合得到第1管延伸引物混合物，延伸引物名称末尾为E2的延伸引物混合得到第2管延伸引物混合物，类推，得到11管延伸引物混合物和1管单独延伸引物，共计12管；(3)以人肺组织基因组为模板，将12管扩增引物混合液分别进行PCR，获得PCR产物；(4)将步骤(3)获得的PCR产物进行碱性磷酸酶消化；(5)将步骤(4)消化后的产物进行延伸反应：12管扩增引物得到的产物分别对应12管延伸引物，P1对应E1，以此类推；(6)在96孔板或384孔板将步骤(5)延伸反应后得到的产物、清洁树脂和水混合；旋转96孔板或384孔板进行脱盐去离子防干扰处理；接着离心；对上清进行分析；(7)MassARRAY系统Nanodispenser点样仪进行芯片点样，利用Analyzer分析仪芯片扫描；扫描结果以Typer4.0软件分析各目的基因的突变状况，在质谱峰变异碱基处出现峰，则判断为突变。