[发明专利]一种铁皮石斛药用原球茎大型生物反应器克隆生产工艺

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛药用原球茎大型生物反应器克隆生产工艺，属于生物工程技术领域，所述的大型生物反应器为150升植物细胞专用反应器，具有光照、控温、补料、搅拌、无菌取样、无菌出料、进气过滤和远程控制功能；所述的原球茎克隆生产工艺，步骤包括种胚微粒诱导萌发，将原球茎种子接入150升植物细胞专用反应器中，经暗培养阶段、光照培养阶段和阶段补料，40天后收集原球茎。测定石斛多糖含量为48%，甘露糖33%，灰分为4.5%，浸出物16.3%。与传统原球球茎组培相比，本发明具有生产规模大，生产成本低，生产过程中无污染，增殖倍数可达40‑60倍，石斛药效成份表达稳定、表达量高，克隆生产全程可控，产品安全系数高。

主权项

一种铁皮石斛药用原球茎大型生物反应器克隆生产工艺，其特征在于，步骤包括：种胚微粒诱导萌发，得到原球茎种子，配制克隆生产培养基和补料培养基，转入150升植物细胞专用反应器中，在位灭菌后将原球茎种子接入，先后进行暗培养和光照培养，完成培养收集原球茎后进行称重换算增殖系数并按药典标准进行检测，接种量为：15g/L；暗培养的参数为：温度25℃、通气2m3/min、转速120转/min、pH5.5、周期15天；光照培养的参数为温度27℃、通气4m3/min、转速150转/min、pH5.5、周期25天，每隔7天进行一次补料，种胚微粒取自铁皮石斛的果荚，果荚先用酒精棉球擦拭表面，于5~10%次氯酸钠处理10~20min，无菌水冲洗3~5次，然后浸入70~75%酒精中30s~1min，无菌水冲洗3~5次，置于接种盘中切开果荚底部，均匀地播入装有种子液体培养基的通气培养瓶中，原球茎克隆生产培养基的配方为：改良MS、2%蔗糖、1%葡萄糖、15%马铃薯提取汁，补料培养基配方为：克隆培养基浓缩10倍，其中改良MS为销酸铵和氯化钙减半，其他元素不变，所述种子液体培养基的配方为1/2改良MS、4%蔗糖、15%马铃薯提取汁、pH5.5，其中1/2改良MS的配方为：销酸铵和氯化钙减半，其他不变。