[发明专利]一种含N-非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖的分离分析方法

摘要

本发明公开了一种含N‑非取代葡萄糖胺（GlcNH3+）硫酸类肝素二糖的分离分析方法，该质谱峰面积校正因子可用于实际生物样品中硫酸类肝素和肝素二糖的定量检测。本发明能快速检测GlcNH3+硫酸类肝素二糖，其含量对临床药物肝素抗凝效果的影响研究及生物样品二糖组分检测等有重要的作用。

主权项

一种含N‑非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖的分离分析方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）将胺类离子对试剂溶解于去离子水中，用pH调节试剂调pH值至8‑8.8，制得浓度为15mM‑45mM的流动相A；（2）将胺类离子对试剂溶解于体积百分比为80%的乙腈溶液中，用pH调节试剂调pH值至8‑8.8，制得浓度为15mM‑45mM的流动相B；（3）将待测的含N‑非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖溶解于去离子水中，配制成浓度为250ng/mL的待测溶液，过滤，过ACQUITY UPLC BEH C18柱：流速为0.1mL/min，洗脱梯度为0‑30min：100%‑85%流动相A、0%‑15%流动相B，30min‑50min：85%‑75%流动相A、15%‑25%流动相B，50min‑60min：75%‑35%流动相A、25%‑65%流动相B；PDA检测器在200nm‑600nm全波段检测的条件下检测分离色谱图；（4）通过质谱检测及紫外检测，分别得到紫外检测峰面积和质谱检测峰面积，计算出离子化效率和质谱峰面积校正因子，再计算出含N‑非取代葡萄糖胺硫酸类肝素二糖的百分含量。