[发明专利]产3-羟基丙酸均聚物/共聚物的重组菌及构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种利用葡萄糖合成3‑羟基丙酸和3‑羟基丁酸共聚物的重组菌的制备方法。该方法可包括如下步骤：将甘油三磷酸脱氢酶的编码基因、三磷酸甘油磷酸酶的编码基因、甘油脱水酶1的编码基因、甘油脱水酶2的编码基因、甘油脱水酶3的编码基因、甘油脱水酶激活酶A的编码基因、甘油脱水酶激活酶B的编码基因、3‑羟基丙醛脱氢酶的编码基因、PHA聚合酶的编码基因、3‑羟基丙酰辅酶A连接酶的编码基因、β‑酮基硫解酶的编码基因和NADPH依赖的乙酰乙酰辅酶A还原酶的编码基因导入受体菌，得到重组菌A。本发明的实验证明，通过代谢路径的调控，该工程菌利用葡萄糖为碳源可一步生产3‑羟基丙酸和3‑羟基丁酸的共聚物。

主权项

1.重组菌A的制备方法，包括如下步骤：将重组表达载体pMDC01和重组表达载体p15A‑68导入大肠杆菌，得到重组菌A；所述重组表达载体pMDC01为将序列表中的序列6正向插入到重组表达载体pZQ03‑dhaB‑gpp‑gpd‑GdrAB的Xma I单酶切位点得到的载体；所述重组表达载体pZQ03‑dhaB‑gpp‑gpd‑GdrAB为将序列表中的序列4的第18‑1841位和序列5的第16‑369位正向插入到重组表达载体pZQ03‑dhaB‑gpp‑gpd的Xma I单酶切位点得到的载体；所述重组表达载体pZQ03‑dhaB‑gpp‑gpd为将序列表中的序列1和序列2正向插入到重组表达载体pZQ03‑dhaB的Spe I单酶切位点得到的载体；所述重组表达载体pZQ03‑dhaB为将序列表中的序列3正向插入到pZQ03载体的Xba I单酶切位点得到的载体；所述重组表达载体p15A‑68是按照包括如下步骤的方法制备获得的：分别用限制性内切酶Hind III和SpeI双酶切pBHR68质粒和p15A质粒，酶切后的pBHR68质粒胶回收其大片段，p15A质粒酶切后胶回收其小片段，将胶回收后所得的所述大片段和所述小片段连接后所形成的重组质粒测序，结果为序列表中的序列7、序列11、序列12与氯霉素抗性基因连接，所述重组质粒即为所述重组表达载体p15A‑68；所述p15A质粒的载体全序列如序列表中序列27所示。