[发明专利]五种二苯乙烯三聚体的制备方法及其应用

摘要

五种二苯乙烯三聚体的制备方法及其应用，以体外α‑葡萄糖苷酶抑制活性为导向，指导中药香附子的分离纯化过程，该制备方法包括药材超声提取、硅胶柱层析分离、大孔树脂柱层析分离、凝胶柱层析分离、反相制备HPLC分离。经HR‑MS和NMR鉴定，该五种二苯乙烯三聚体为(±)‑(E)‑cyperusphenol A、(E)‑mesocyperusphenol A、cyperusphenol C、cyperusphenol B、cyperusphenol D。另外，本发明首次公开了五种二苯乙烯三聚体化合物对α‑葡萄糖苷酶的抑制作用，以及其作为制备α‑葡萄糖苷酶抑制剂药物的应用。经药理实验证明，该五种二苯乙烯三聚体化合物均具有很强的体外α‑葡萄糖苷酶抑制活性，其活性较阳性对照药（阿卡波糖）强1000倍，较已知的二苯乙烯二聚体（scirpusin A和scirpusin B）强5‑10倍。

主权项

五种二苯乙烯三聚体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、药材超声提取：将香附子粉末用80%甲醇冷浸后超声提取，所得提取物用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到各提取部位；将各提取部位分别制成不同浓度的DMSO溶液，进行体外AGH抑制活性检测，确定乙酸乙酯提取部位活性最强；步骤2、硅胶柱层析分离：所述乙酸乙酯提取部位采用硅胶常压层析分离，分别用不同比例的石油醚、二氯甲烷、甲醇混合溶剂梯度洗脱；然后分别收集各洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得各提取部位；将各提取部位分别制成不同浓度的DMSO溶液，进行体外AGH抑制活性检测，确定活性最强的提取部位；步骤3、大孔树脂柱层析分离：将步骤2中所得活性最强部位用HPD101型大孔吸附树脂分离，分别用不同比例的甲醇、水混合溶剂梯度洗脱；分别收集各洗脱液，减压浓缩回收溶剂，得各提取部位；将各提取部位分别制成不同浓度的DMSO溶液，进行体外AGH抑制活性检测，确定活性最强的提取部位；步骤4、凝胶柱层析分离：将步骤3中所得活性最强部位用Sephadex LH‑20凝胶纯化分离，甲醇洗脱，流速控制为30mL/h，每0.25个柱体积收集一次，共收集洗脱液4BV；将各洗脱液进行体外AGH抑制活性检测，确定2.25‑3.25 BV洗脱部位活性最强；步骤5、反相制备HPLC分离：将步骤4中所得活性最强洗脱部位采用反相制备型高效液相色谱进行纯化，40%甲醇‑60%水溶液等度洗脱，分别收集保留时间为8.1 min、10.6 min、11.9 min、17.7 min和19.6 min的流份，冷冻干燥后分别得到纯度大于95%的五种二苯乙烯三聚体化合物；所述的五种二苯乙烯三聚体的结构式分别为：其中，所述保留时间为8.1min的流份冷冻干燥后得到(±)‑(E)‑cyperusphenol A；所述保留时间为10.6 min的流份冷冻干燥后得到cyperusphenol B；所述保留时间为11.9 min的流份冷冻干燥后得到cyperusphenol D；所述保留时间为17.7 min的流份冷冻干燥后得到(E)‑mesocyperusphenol A；所述保留时间为19.6min的流份冷冻干燥后得到cyperusphenol C。