[发明专利]一种桃砧木抗南方根结线虫离体快速筛选方法

摘要

本发明公开了一种桃砧木抗南方根结线虫离体快速筛选方法，该方法包括以下步骤：育苗；二龄根结线虫的分离；23％Pluronic F-127的制备；接种：采用6孔细胞培养板，每孔中加入5ml 23％Pluronic F-127和500条二龄根结线虫混匀，在胶将要凝固时将桃幼苗根置于孔中，保鲜膜包裹保湿培养。染色：在接种30h后取根尖采用次氯酸钠-酸性品红-甘油法染色，染色后压片。统计鉴定：显微镜下统计线虫数量，根据侵染数量界定植物的抗病性。本发明设计新颖，操作简单，安全方便，解决了试验中植物根结线虫抗性鉴定不稳定，历时长，统计复杂的问题。

主权项

一种桃砧木抗南方根结线虫离体快速筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)育苗：将桃种子低温砂藏备用；(2)二龄根结线虫的分离：将感染根结线虫的番茄根打碎，分别过20、100、200、500目网筛，收集500目网筛上的虫卵，通过蔗糖浮选法除杂、浓缩虫卵，将浓缩的虫卵倒于铺有一层200目网筛和两层滤纸的培养皿中，3d后收集二龄根结线虫；(3)23％Pluronic F‑127的制备：称23gPluronic F‑127加入80ml 4℃预冷的无菌水，适当搅拌，放于4℃冰箱中融化；(4)接种：采用6孔细胞培养板，每孔中加入5ml 23％Pluronic F‑127和500条二龄根结线虫混匀，在胶将要凝固时将桃幼苗根置于孔中，保鲜膜包裹保湿培养；(5)染色：在接种30h后取根尖采用次氯酸钠‑酸性品红‑甘油法染色，染色后压片；(6)统计鉴定：显微镜下统计线虫数量，根据侵染数量界定植物的抗病性。