[发明专利]鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白、其抗体及制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白、其抗体及制备方法和应用。该重组蛋白具有与天然OmpA/MotB蛋白相似的免疫反应活性，能够与RA抗体特异性结合，而与鸭沙门氏菌阳性血清、鸭大肠杆菌阳性血清、鸭肿头败血症病毒阳性血清、禽流感病毒(H5)阳性血清、鸭瘟病毒阳性血清、鸭肝炎病毒阳性血清等不产生交叉反应，可作为检测RA全菌抗体的检测抗原应用，且由于该重组蛋白非全细菌，应用其进行检测时无散毒危险；此外，该重组蛋白的制备方法简单，适于工业化大规模生产，能够实现产品的标准化，利于不同实验室之间的结果比较。

主权项

1.鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白在制备鸭疫里默氏菌基因工程亚单位疫苗或抗体检测试剂中的应用；其特征在于：制备鸭疫里默氏菌OmpA/MotB去信号肽重组蛋白的方法包括如下步骤：取工程菌接种于含Amp的LB培养基中，以150‑200r/min、37℃培养12h或至OD600nm为0.6，然后按体积比为1:100的比例加入到含Amp的LB培养液中37℃继续培养至OD600nm达0.6后，于0.4mmol/L IPTG、30 ℃条件下诱导12h；收集菌液，离心，将获得的菌体沉淀用1/10菌液体积的20 mmol/L、pH 8.0的Tris‑HCl悬浮，冰水浴超声裂解菌体，而后12000r/min离心10min，沉淀用1/50原菌液体积的8mol/L尿素溶液溶解，8000r/min离心10min，取溶解液，加入5×SDS loading buffer煮沸，SDS‑PAGE分离重组蛋白，用质量分数为0.25%KCl预冷染色后切胶，透析胶块，至胶块透明后，将所得蛋白液浓缩即得；是将重组表达载体转入大肠杆菌BL21（DE3）中而得到；所述重组表达载体为将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的OmpA/MotB去信号肽重组蛋白编码基因克隆入原核表达质粒pGEX‑4T‑1中而得到。