[发明专利]一种固定化马来酸顺反异构酶及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201510364026.9 | 申请日： | 2015-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN104962571B | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;刘文茂;周丽;崔文璟;刘中美 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/90;C12N11/04;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种固定化马来酸顺反异构酶及其制备方法与应用，属于酶学与酶工程技术领域与生物化工领域。本发明将R5肽段连接在马来酸顺反异构酶的N端，再将R5‑MaiA用戊二醛交联，最后用硅反应液将交联后的R5‑MaiA进行包埋，完成马来酸顺反异构酶的固定化。用成本低、易操作的方法获得了稳定性高的固定化马来酸顺反异构酶(R5‑MI‑CLEA‑Si)，固定化酶最适反应温度为55℃，最适反应pH为7.7；在55℃条件下固定化酶的半衰期为4h，游离酶的半衰期为0.5h，固定化酶的稳定性是游离酶的8倍，重复催化反应8次后固定化酶的酶活仍能保留75％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 固定 马来 顺反异构 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种固定化马来酸顺反异构酶的制备方法，其特征在于，在马来酸顺反异构酶的N端融合SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码的R5短肽，所得重组酶与交联剂交联获得交联酶聚集体，再与硅化反应液、正硅酸甲酯混合剧烈搅拌，得到固定化酶，所述马来酸顺反异构酶来源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)，所述交联剂为10％的戊二醛，所述硅化反应液是pH＝8的含0.1M磷酸氢二钾和0.1M氢氧化钠的溶液。
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