[发明专利]一种单个细胞筛选的方法及其应用

摘要

本发明提供一种单个细胞筛选的方法及其应用，具体地说，本发明提供一种单个细胞筛选的方法，包括初步分散、显微镜辅助分散、计数稀释、培养液配制和培养几大步骤，以消化分散后的贴壁细胞或悬浮细胞为对象，调节细胞在培养瓶中的浓度，以高效地筛选出大量的单个细胞，易于操作，对操作人员的操作经验没有要求，可在无菌条件下快速地获得大量的、无菌的、变异少的单个细胞，在新药筛选、疫苗制备、单克隆抗体制备上具有较大的应用推广价值。

主权项

一种单层细胞筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1)初步分散：取消化分散的贴壁细胞或悬浮细胞，用无血清培养基稀释100‑1000倍，取出250‑500μL移至25cm²培养瓶，晃动，使细胞均匀分布于培养瓶中；2)辅助分散：用40倍显微镜观察细胞分布情况，轻轻晃动培养瓶直到细胞均匀分布于细胞瓶中；3)计数稀释：采用40倍镜显微镜，随机选5个视野，计算每个视野中细胞数量并计算平均数，晃动或稀释调整至每个视野中细胞平均数量为1‑3，用无血清培养基稀释200‑500倍，得细胞液；4)培养液配制：向50mL无血清培养基中加入10‑20mL血清，加无血清培养基定容至100mL，得培养液；5)培养：取250‑500μL步骤3)所得的细胞液，加入20‑40mL步骤4)所得的培养液，混匀，以100‑200μL细胞液/孔的量转移至96孔细胞培养板，培养。