[发明专利]一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体，包括a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体，具有表达量高，表达稳定性好，可以插入较长的外源基因片段，且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点，可以用于表达多种外源蛋白，也可以用于制备动物疫苗，具有广阔的应用价值和应用前景。

主权项

一种重组植物弹状病毒载体系统，其特征在于，包括三类质粒载体，一是含有全长基因组编码信息的cDNA转录质粒载体，二是组成RNP核心的辅助蛋白的蛋白表达质粒载体，三是RNA沉默抑制子蛋白的表达质粒载体；所述的cDNA转录质粒载体包括：a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白；所述的RNP核心的辅助蛋白的蛋白表达质粒载体包括N、P和L三种蛋白，这三种蛋白被同时插入同一个表达载体中，得到pGD‑NPL；所述的RNA沉默抑制子蛋白的表达质粒载体是由烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus, TEV) Hc‑Pro基因、番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus, TBSV) P19基因和大麦条纹花叶病毒(Barley stripe mosaic virus, BSMV) γb基因所编码的RNA沉默抑制子被分别插入pGD载体，得到的三个表达载体：pGD‑Hc‑Pro、pGD‑P19和pGD‑γb；所述的重组植物弹状病毒是苦苣菜黄网病毒(sonchus yellow net virus，SYNV)。