[发明专利]一种可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法

摘要

本发明属于水环境中痕量离子的检测领域，具体涉及一种可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法。该方法主要为将对UO22+具有特异性识别的DNAzyme固定在磁珠表面，在纳米金表面预组装辣根过氧化物酶；然后利用UO22+对DNAzyme的切割作用和DNA的杂交反应实现磁珠与纳米金的连接，经过外磁场的分离收集后，辣根过氧化物酶高效催化H2O2氧化四甲基联苯胺使溶液由无色变为蓝色，从而实现对UO22+离子的灵敏、特异可视化快速检测。该方法因具有灵敏度高、特异性强、抗基体干扰强、简单快速和低成本等优点，可用于各种水样品中痕量UO22+离子的现场快速可视化检测。

主权项

一种可视化快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）DNAzyme功能化磁珠储备液的制备；（2）固定有连接探针的纳米金悬浮溶液的制备：将5 μL 10 ppm金纳米粒子和5 μL 10 μM连接探针DNA，其序列为5’‑biotin‑AAA AAT AGT GAG TT‑3’，加入到40 μL PBS缓冲液中，混匀后在37 ℃下恒温振荡1 h，制得连接探针修饰的纳米金悬浮溶液，0‑4℃存储备用；（3）辣根过氧化物酶修饰的信号探针溶液的制备：将2.5 μL 10 μM信号探针5’‑biotin‑ATATAT TGT CCG TGC TAG AAG GAA CTC ACT AT‑3’和2.5 μL 0.02 mg/mL 辣根过氧化物酶溶液加入到25 μL PBS缓冲液中，混匀后，在37 ℃下恒温振荡30 min，制得辣根过氧化物酶修饰信号探针溶液，0‑4℃存储备用；（4）实际水样中痕量UO22+的可视化检测：取10 μL的实际水样与步骤（1）制备的50 μL DNAzyme功能化磁珠储备液混匀，室温下振荡1 h；在磁铁作用下分离磁珠后，用100 μL PBS缓冲液洗涤3次，随后加入50 μL步骤（2）制备的固定有连接探针的纳米金悬浮溶液，混匀后，在37 ℃下恒温振荡1 h，得到连接有纳米金的磁珠悬浮液；在磁铁作用下分离磁珠后，用100 μL的PBS缓冲液洗涤3次，加入30 μL步骤（3）制备的辣根过氧化物酶修饰的信号探针溶液，混匀后，在37 ℃下恒温振荡30 min；在磁铁作用下，用100 μL的PBS缓冲液清洗5次后，加入300 μL 四甲基联苯胺/H2O2溶液，振摇20 min后通过裸眼观测混合溶液颜色变化或应用紫外分光光度计测试溶液的吸光度对UO22+进行半定量及定量快速检测。