[发明专利]构建基因突变测序文库的引物和方法以及试剂盒

摘要

本发明涉及一种涉及47种基因的PCR引物以及标签PCR引物，所述标签PCR引物由PCR引物以及连接于PCR引物对中至少一条引物5’端的DNA标签序列组成，所述DNA标签序列选自SEQ ID NO107—SEQ ID NO126。本发明还涉及应用所述由标签PCR引物的DNA标签构建测序文库的方法和试剂盒。本发明所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100％，所提供的扩增引物与DNA标签形成一个特异性、灵敏度和重复性之间达到优化、平衡的检测产品，能并行检测体细胞突变与单核苷酸多态性，一次检测能够准确区分1‑20种样本来源的多条碱基序列。

主权项

一种PCR引物，其特征是，包含所有如下针对目标基因突变位点设计的引物序列：针对AKT1基因的SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，针对AKT3基因的SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4，针对APC基因的SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8，针对ATM基因的SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10，针对BRAF基因的SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14，针对CDH1基因的SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16，针对CDKN2A基因的SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18，针对CTNNB1基因的SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20，针对CYP2D6基因的SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24，针对CYP3A5基因的SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26，针对DPYD基因的SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28，针对EGFR基因的SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30，针对ERCC1基因的SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32，针对ERCC2基因的SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34，针对FGFR1基因的SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36，针对FGFR2基因的SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38，针对FGFR3基因的SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40，针对FLT3基因的SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42，针对GSTP1基因的SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44，针对HER2基因的SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:46，针对HRAS基因的SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48，针对IDH1基因的SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50，针对IDH2基因的SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52，针对KIT基因的SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，针对KRAS基因的SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:58，针对MEK1基因的SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60，针对MET基因的SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62，针对MTHFR基因的SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66，针对NRAS基因的SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68，针对PDGFRA基因的SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70，针对PIK3CA基因的SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72，针对PIK3R1基因的SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:74，针对PIK3R5基因的SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76，针对PTEN基因的SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78，针对PTPN11基因的SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:80，针对RB1基因的SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82，针对STK11基因的SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84，SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:86，针对TP53基因的SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88，针对TPMT基因的SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90，针对TSC1基因的SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:92，针对TYMS基因的SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:94，针对UGT1A1基因的SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96，针对VEGFA基因的SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:98，针对VEGFR2基因的SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:100，针对VEGFR3基因的SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:102，针对VHL基因的SEQ ID NO:103和SEQ ID NO:104，针对XRCC1基因的SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:106。