[发明专利]一种灵芝菌的深层发酵方法

摘要

本发明公开了一种灵芝菌的深层发酵方法，选用人参、蜂花粉、灵芝孢子粉和茯苓等天然中草药原料作为灵芝菌深层发酵培养基，具有目的产物的产量高、质量稳定、菌丝体生长良好、发酵周期短、生产工艺简单、提取得率高、营养物质丰富、成本低等特点，是一项经济效益显著的环保型的药用真菌深层发酵技术，具有显著的开发应用前景。

主权项

一种灵芝菌的深层发酵方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）将接种的斜面放于26‑28℃下培养5‑7d ；（2）将长满菌丝体的斜面接种于液体培养基，于摇床转速80‑100r/min，冲程7‑8cm 往复震荡，26‑28℃振荡培养2‑3d，制成种子悬浮液；（3）种子罐种子培养，接种量15%‑20%、温度27‑30℃，光照条件：连续黑暗条件，搅拌速度160‑180r/min，无菌空气通气量为每分钟2.5m3，罐压0.04MPa，发酵培养48‑72h ；pH 降至4.5‑5.0 ；（4）发酵罐发酵培养：接种量25‑30%，温度27‑30℃，搅拌速度为150‑200r/min，无菌空气通气量为每分钟2m3，罐压0.05MPa，培养48‑72h ；发酵液变稠，菌体开始自溶，pH 降至3.0‑3.5，残糖量降至0.2‑0.3% ；（5）酶解：加入终浓度为0.5%的复合蛋白酶，终浓度为0.75%的淀粉酶，终浓度为0.75%的纤维素酶；蛋白酶为2×105u/kg，淀粉酶为1.0×105u/kg，纤维素酶为1.5×105u/kg ；温度55‑60℃，时间3‑4h；斜面培养基：马铃薯煮汁1000mL、脱脂奶粉30g、葡萄糖30g、琼脂30g、蛋白胨30g、酵母膏5g、硫酸镁0.2g、维生素B1 0.1g，pH 自然；深层发酵培养基，按重量百分数计：人参粉2.0%、蜂花粉2.0%、灵芝孢子粉1.0%、茯苓粉1.0%、大豆粉2.0%、酵母粉0.5%、葡萄糖3.0%、硫酸镁0.2%、磷酸氢二钾0.3%、氯化钠0.2%、维生素B1 0.1%、山茶油0.3%，余量为水，pH=6‑7，粉末细度：80‑100 目，制成液体培养基。