[发明专利]一种蝎毒素蛋白包涵体的纯化与复性方法与应用在审
| 申请号： | 201510386346.4 | 申请日： | 2015-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN105085644A | 公开（公告）日： | 2015-11-25 |
| 发明（设计）人： | 李莉 | 申请（专利权）人： | 广州格拉姆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/14 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 510535 广东省广州市萝岗*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种蝎毒蛋白包涵体的纯化与复性方法，主要是利用重组大肠杆菌表达蝎毒蛋白，且在蝎毒蛋白的C端含有His-tag，然后利用变性缓冲液使蝎毒蛋白中的二硫键打开，用组氨酸亲和层析柱纯化变性的蝎毒蛋白，再利用复性缓冲液对蝎毒蛋白进行复性，所述的复性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/L Na2HPO4，10～100mmol/L Tris，0.1～1mol/L L～Arg，1～5mmol/L EDTA，0.1～5mmol/L GSH，0.05～0.5mmol/L GSSG，5～20％(v/v)甘油，0.01～5％(v/v)tritonX～100，pH 7～9。利用本发明制备蝎毒蛋白，具有操作简单、复性效果好的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 毒素 蛋白 包涵 纯化 复性 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将蝎毒蛋白包涵体投入变性缓冲液，搅拌处理，离心，收集沉淀，得到变性的蝎毒蛋白；所述的变性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/L Tris，1～10mol/L Gdn‑HCl，20～100mmol/L DTT，pH 7～9，溶剂为水；(2)纯化变性的蝎毒蛋白；(3)用复性缓冲液溶解变性的蝎毒蛋白，复性处理，得到复性的蝎毒蛋白，所述的复性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/L Na2HPO4，10～100mmol/L Tris，0.1～1mol/L L‑Arg，1～5mmol/L EDTA，0.1～5mmol/L GSH，0.05～0.5mmol/L GSSG，5～20％v/v甘油，0.01～5％v/v tritonX～100，pH 7～9，溶剂为水。
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