[发明专利]一种胶体金和乳胶微球联合标记的金标免疫层析试纸条的制备方法

摘要

本发明公开了一种胶体金和乳胶微球联合标记的金标免疫层析试纸条的制备方法,包括以下步骤：(1)利用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金溶液；(2)用胶体金溶液标记蛋白分子；(3)直接购买或制备50nm的红色乳胶微球；(4)用乳胶微球标记蛋白分子；(5)对于上述步骤中得到的标记胶体金溶液和乳胶标记溶液进行质量鉴定；(6)将硝酸纤维素膜贴于PVC塑料底板上；(7)将样品垫、结合垫、吸水垫、手柄纸、Max胶组装于PVC塑料垫板上；(8)将制备好的金标试纸条按照产品的质量标准进行质检。本发明的优点是提高了金标免疫层析试纸条的检测灵敏度和检测范围，从而扩大了胶体金免疫诊断的应用领域和定量应用。

主权项

一种胶体金和乳胶微球联合标记的金标免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金溶液，制备的胶体金粒径在30nm～40nm范围内；(2)用胶体金溶液标记蛋白分子，因为蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，胶体金溶液和蛋白分子这二者容易形成牢固的结合物，如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力，除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量都影响胶体金溶液与蛋白质的结合，因此标记前应调节胶体金的pH值，并选择合适的离子浓度条件标记蛋白分子，标记之前应对待标记的蛋白溶液进行透析，以除去聚合物，胶体金标记蛋白以后应通过离心重悬的方式进行纯化，得到标记胶体金溶液；(3)直接购买或制备50nm的红色乳胶微球；(4)用乳胶微球标记蛋白分子，标记时先将待标记蛋白在pH值为6的2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液中进行透析；透析后对待标记蛋白进行合适的处理，主要是除去缓冲液中游离的氨基；用1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)碳二亚胺(EDC)和N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)缓冲体系活化乳胶微球上的羧基，调整乳胶和待标记蛋白溶液的pH值后，将两者混合，用磁力搅拌器搅拌2～8小时，利用抗体蛋白分子表面的氨基与乳胶微球上的羧基发生酰胺缩合反应完成偶联，然后将标记物离心，离心分离后弃掉上清液，留取沉淀物，此时的沉淀物即为乳胶‑蛋白分子标记物，用缓冲液将该沉淀物调至所需浓度得到含表面活性剂及防腐剂的乳胶标记溶液；(5)对于上述步骤中得到的标记胶体金溶液和乳胶标记溶液进行质量鉴定，质量鉴定合格后将标记胶体金溶液和乳胶标记溶液按照体积比1:1的方式混合，将该混合液用划膜喷金机喷涂于结合垫上烘干；(6)将硝酸纤维素膜贴于PVC塑料底板上，将对照线和检测线要包被的蛋白分子分别用适宜的稀释液稀释后，用划膜喷金机将其分别喷涂于硝酸纤维素膜上烘干；(7)将样品垫、结合垫、吸水垫、手柄纸、Max胶组装于PVC塑料垫板上，切条、密封加干燥剂保存，如果是卡型或笔型试纸，还需要将试纸条扣到卡塞中再进行包装；(8)将制备好的金标试纸条按照产品的质量标准进行质检。