[发明专利]一种甲烷氧化菌丰度的自动化检测方法

摘要

本发明公开了一种甲烷氧化菌丰度的自动化检测方法。包括构建原态微生物油气与水合物勘探技术的自动化工作站、样品处理、采用工作站自动液体处理装置完成移液、自动核酸提取设备提取与纯化DNA、琼脂糖电泳检测、甲烷氧化菌丰度的实时荧光定量PCR检测、获得其丰度结果等步骤。本发明基于自动分析方法，使甲烷氧化菌的核酸提取与纯化步骤实现自动化；使其特异基因PCR反应体系的配制实现自动化，减少手工操作引入的人为因素所造成的误差，操作步骤在洁净环境中运行，整个检测过程通过计算机软件控制，检测流程可以追溯，可实现系统误差的统一校正。

主权项

1.一种甲烷氧化菌丰度的自动化检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.构建原态微生物油气与水合物勘探技术的自动化工作站；所述工作站包括自动液体处理装置、核酸提取设备、PCR反应体系配置系统；S2.样品处理，每个样品得到大于1.5ml的上清液；S3.采用所述原态微生物油气与水合物勘探技术的自动化工作站的自动液体处理装置完成移液；具体是执行自动液体处理装置设定的程序，将不同的试剂通过自动控制机械臂上移液通道和移液模块的动作自动加入对应的样品板、结合板、洗涤板和洗脱板中；S4.核酸提取设备提取与纯化DNA，将所有的样品板都准备好后，执行所述原态微生物油气与水合物勘探技术的自动化工作站的设定程序，得到土壤和/或沉积物中的总基因组DNA；核酸提取与纯化流程结束后经自动液体处理装置将样品的核酸提取液转移至微量PCR管中，标记清楚后于‑20℃冰箱中保存；S5.琼脂糖电泳检测；S6.经实时荧光定量PCR检测，获得甲烷氧化菌丰度；其中，步骤S1所述自动液体处理装置包括操作平台、机械臂、移液通道及实验用品的载架和辅助设备；在所述操作平台上设置有若干定位轨道，所述实验用品的载架固定放置于上述定位轨道上；所述机械臂上装载移液工具和移板机械手，所述移液工具包括单个或多个独立控制的移液通道，所述机械臂带动移液通道精确移动；移液通道上设置若干移液模块以及纳升级的微量点样模块；所述辅助设备包括样品振荡装置、孵育装置、样品装载装置、样品编号扫描和记录装置、实验耗材的转移装置、上下游设备的衔接装置；所述核酸提取设备包括大体积提取磁头及大体积提取磁头控制装置；在所述核酸提取设备中内置多个核酸纯化程序，通过电脑软件控制而实现自动化操作；所述移液通道依据通道内活塞的移动来推动空气进行吸液和放液；所述机械臂上的每个移液通道都设有独立的动态定位系统；移液通道直接自动装卸一次性吸头或可重复使用的针式吸头。