[发明专利]一种鉴别阿胶真伪的半巢式‑多重PCR法

摘要

本发明涉及食药检测技术领域，具体涉及一种鉴别阿胶真伪的半巢式‑多重PCR法，用于鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。包括首先采用液氮研磨改良的SDS法从阿胶中提取高质量的DNA，然后设计通用引物P1和P2进行第一轮扩增，将扩增产物作为第二轮PCR的模板；再使用包含通用引物P1和4种物种(驴、马、猪和牛)特异性引物A、B、C和D的混合引物进行第二轮多重PCR扩增，电泳检测第二轮扩增产物，根据电泳条带的大小，判断阿胶中是否掺假。本发明技术方案能够在保证检测特异性的前提下，提高现有以PCR技术为基础的阿胶真伪检测方法的检测灵敏度，同时缩短检测时间。

主权项

一种鉴别阿胶真伪的半巢式‑多重PCR法，其特征在于由如下步骤组成：(1)采用液氮研磨法处理阿胶样品，再用SDS法提取DNA，备用；(2)根据物种线粒体DNA序列设计通用引物正向引物P1和反向引物P2，然后以步骤(1)中制备的DNA为模板进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；(3)以步骤(2)中PCR扩增产物为模板，用正向通用引物P1和特异反向引物A、B、C、D进行第二轮多重PCR扩增；(4)将(3)中PCR产物电泳，根据电泳条带大小判断阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分；所述步骤(2)正向引物P1核苷酸序列为5’‑CCMTCAAACATYTCATCATG‑3’，反向引物P2核苷酸序列为5’‑CTGGGTCTCCMAGMAGGTC‑3’；所述步骤(3)中第二轮多重PCR的引物核苷酸序列分别如下：驴特异反向引物A：5’‑TTTCACAGTAATAGCCACAGCAT‑3’；马特异反向引物B：5’‑TCATCACAGCCCTGGTAGTCGTA‑3’；猪特异反向引物C：5’‑GCCTTCCACTTTATCCTGCCATTC‑3’；牛特异反向引物D：5’‑AGGCGGATTCTCAGTAGACAAAGC‑3’。