[发明专利]一种支气管镜下获取肿瘤组织进行树突细胞培养扩增方法

摘要

本发明涉及一种支气管镜下获取肿瘤组织进行树突细胞培养扩增方法，包括以下步骤：在支气管镜下获取肿瘤组织，通过gentleMACS全自动组织温和处理器中分离出肿瘤组织单细胞悬液；过滤离心，制备成肿瘤抗原，灭菌冻存；制备树突细胞。本发明在支气管镜下获取组织通过在gent leMACS全自动组织温和处理器制备成单细胞悬液，制备成肿瘤抗原，从而成功诱导DC细胞，大大提高了效率，简化组织获取及处理操作，大大避免了常规机械碾磨所存在的操作不稳定，易损失，活率低等缺陷，为诱导DC的基础研究和临床治疗提供了很好的工具。同时，由于采取支气管镜获取组织，只需在手术过程中，在不影响病理诊断的前提下，切下肿瘤组织，满足扩增需要，极大减少了患者的痛苦。

主权项

一种支气管镜下获取肿瘤组织进行树突细胞培养扩增方法,其特征在于，包括以下步骤：步骤1)，通过支气管镜引导，获取肿瘤组织，去除脂肪组织和坏死组织；步骤(2)，将步骤(1)获取的肿瘤组织在gent leMACS全自动组织温和处理器中分离出单细胞悬液；步骤(3)，将步骤(2)制备的单细胞悬液过滤离心，制备成自体肿瘤抗原，灭菌冻存；步骤(4)制备树突细胞，在制备树突细胞第0小时，将外周血单个核细胞置于OKM100培养基中、36.5‑37.5℃CO₂孵箱中培养，培养结束后，轻轻摇晃培养瓶，将细胞悬液转移至新的培养瓶；向剩余贴在培养瓶壁上的外周血单个核细胞中加入OKM100培养基，向OKM100培养基中再加入IL‑4及GM‑CSF构成的第一体系,置于36.5‑37.5℃的CO₂孵箱中开始计算培养时间；步骤(5)第65‑75小时后，将步骤(4)中的OKM100培养基部分换成新鲜的OKM100培养基，继续置于36.5‑37.5℃的CO₂孵箱中培养；步骤(6)第140‑150小时后，将步骤(5)中的OKM100培养基部分换成新鲜的OKM100培养基，再加入TNFα构成第二体系，继续置于36.5‑37.5℃的CO₂孵箱中培养；步骤(7)第185‑195小时后，加步骤(3)制备的自体肿瘤抗原构成第三体系，使得第三体系中的自体肿瘤抗原浓度为1‑100μg/ml，继续置于36.5‑37.5℃的CO₂孵箱中培养，4～8小时后收获DC细胞。