[发明专利]一种镉‑IgG螯合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种镉‑IgG螯合物及其制备方法和应用，该镉‑IgG螯合物是镉离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。本发明建立了镉‑IgG螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测镉‑IgG螯合物在评价一个地区镉污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中镉‑IgG螯合物可以间接反映这个地区人群受镉污染的情况，从而间接反映这个地区镉污染程度。本发明建立的镉‑IgG螯合物定量检测方法其准确度大大提高，并且使检测的重复性得到大大提高。

主权项

一种镉‑IgG螯合物在制备检测血样中镉‑IgG螯合物的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述镉‑IgG螯合物为镉离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成；该镉‑IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：A)镉与IgG的螯合反应：在人源的IgG或按照生物学方法重组的IgG中加入镉离子进行螯合反应，得到反应溶液；B)纯化镉‑IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgG以及多余的镉离子，即得镉‑IgG螯合物；C)对镉‑IgG螯合物的鉴定；其中，步骤B)具体如下：(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水，使镉‑IgG螯合物复溶；(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)中样品，然后上柱，IgG与填料特异性结合；(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05‑0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；(5)收集：收集经过步骤(4)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；(6)透析：将步骤(5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；(7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与镉特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；(8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱；(9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5‑1.0mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；(10)收集：收集经过步骤(9)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；(11)透析：将步骤(10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得镉‑IgG螯合物；其中，步骤C)中具体如下：(1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；(2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的镉‑IgG螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；(3)电泳：连接电泳板，进行电泳；(4)检测：在胶床上找出含镉的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带复溶，然后再采用ICP‑MS法、AAS法或ELISA法检测是否含有镉以及检测镉的含量。