[发明专利]一种汞‑IgG螯合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种汞‑IgG螯合物及其制备方法和应用，该汞‑IgG螯合物是汞离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。本发明建立了汞‑IgG螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测汞‑IgG螯合物在评价一个地区汞污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中汞‑IgG螯合物可以间接反映这个地区人群受汞污染的情况，从而间接反映这个地区汞污染程度。本发明建立的汞‑IgG螯合物定量检测方法其准确度大大提高，并且使检测的重复性得到大大提高。

主权项

一种汞‑IgG螯合物，汞离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成；该汞‑IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：A）汞与IgG的螯合反应：在人源的IgG或按照生物学方法重组的IgG中加入汞离子进行螯合反应，得到反应溶液；B）汞‑IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgG以及多余的汞离子，即得汞‑IgG螯合物；所述步骤B）具体如下：（1）溶解样品：向经过步骤A）得到的反应溶液中加入生理盐水，使汞‑IgG螯合物复溶；（2）平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；（3）上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1）中样品，然后上柱，IgG与填料特异性结合；（4）洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05‑0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；（5）收集：收集经过步骤（4）洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；（6）透析：将步骤（5）中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；（7）平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与汞特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；（8）上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（6）中样本，然后上柱；（9）洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5‑1.0mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；（10）收集：收集经过步骤（9）洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；（11）透析：将步骤（10）中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得汞‑IgG螯合物。