[发明专利]河八王的一种DNA指纹图谱及其获取方法与专用引物有效
| 申请号： | 201510415576.9 | 申请日： | 2015-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN105018481B | 公开（公告）日： | 2018-06-26 |
| 发明（设计）人： | 刘昔辉;李杨瑞;区惠平;张荣华;周会;张革民;杨丽涛;宋焕忠;杨柳;李长宁;张保青;宋修鹏 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所;广西大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248 | 代理人： | 胡吉科 |
| 地址： | 530007 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明提供了河八王的一种DNA指纹图谱及其获取方法与专用引物，所述获取河八王DNA指纹图谱的专用引物，包括引物对SEQ NO：1和SEQ NO：2，引物对SEQ NO：3和SEQ NO：4，引物对SEQ NO：5和SEQ NO：6。采用本发明获取河八王DNA指纹图谱的专用引物获得的河八王DNA指纹图谱的多态性高、特异性好，重复性好；谱带在100bp‑400bp之间，分布集中、均匀，特异性高，便于鉴别；构建的河八王基因组DNA指纹图谱具有唯一性，能够有效而精确的鉴别不同的河八王种质资源，将在利用河八王种质进行甘蔗遗传改良中发挥重要作用。 | ||
| 搜索关键词： | 专用引物 引物 鉴别 基因组DNA 遗传改良 指纹图谱 种质资源 唯一性 多态性 构建 谱带 种质 甘蔗 | ||
【主权项】：
1.一种获取河八王DNA指纹图谱的方法，包括如下步骤：步骤S1：提取河八王的基因组DNA；步骤S2：采用内切酶EcoR I和Mse I对所述河八王的基因组DNA进行酶切，得到酶切产物；步骤S3：将所述酶切产物连接上接头引物进行扩增，得到连接产物；所述接头引物为SEQ NO：7和SEQ NO：8，SEQ NO：9和SEQ NO：10；步骤S4：预扩增反应，采用预扩增引物对所述连接产物进行预扩增反应，其中，所述预扩增引物为SEQ NO：11和SEQ NO：12；步骤S5：选择性扩增反应，采用引物对Narenga 1、引物对Narenga 2和引物对Narenga 3进行选择性扩增，得到AFLP扩增产物；所述Narenga 1是序列表的SEQ NO：1和SEQ NO：2组成的引物对；所述Narenga 2是序列表的SEQ NO：3和SEQ NO：4组成的引物对；所述Narenga 3是序列表的SEQ NO：5和SEQ NO：6组成的引物对；步骤S6：对所述AFLP扩增产物进行毛细管电泳检测扩增产物，分离DNA 标记，显示河八王的DNA指纹图谱。
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